基因工程药物研究与应用
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五、其他工具酶

Bal.31核酸酶分离自海洋细菌埃氏替单胞菌( Altreromonas espejiana),具有单链特异性的核酸内切酶活性,也具有双链特异性核酸外切酶活性。其可控制的3'-5'外切酶可产生3'端呈梯度切除的一系列DNA分子;此外该酶还具有核糖核酸酶活性,可催化核糖体和tRNA的降解,但不具双链特异的核酸外切酶活性。
S1核酸酶(S1 nuclease)是一种对单链高度特异的核酸内切酶,可催化RNA和单链DNA分子降解成为5'单核苷酸,也能作用于双链核酸分子的单链区,于此处切断核酸分子,单链区可小至仅有一个碱基。该酶在分子生物学中的主要用途是给RNA分子定位;也可用于检测核酸杂交程度、双链DNA二级结构差异,削平限制性内切酶切割产生的黏末端;还可以打开双链cDNA合成过程形成的发夹结构。
绿豆核酸酶(mung bean nuclease)来源于绿豆芽,降解单链DNA或RNA,产生带5'磷酸基的产物,在高浓度下也能自两端降解双链DNA,用于去除DNA突出末端。
核糖核酸酶(ribonuclease RNase)是水解核糖-磷酸主链中磷酸二酯键而降解核糖核酸的酶类。一些RNA酶只作用特异结构部位,如发夹、嘌呤碱基或嘧啶碱基,从而产生特异的RNA片段。RNA酶A来源于牛胰,为内切核糖核酸酶,作用于RNA嘧啶核苷酸的3'端磷酸,并切割磷酸二酯键;RNA酶T1分离自米曲霉,它特异作用于鸟苷酸3'端磷酸,并切割与相邻核苷酸相连的磷酸二酯键。这类酶在提取质粒DNA时用于除去RNA;从DNA-RNA杂交链中除去未杂交的RNA。
脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)为内切核酸酶,优先作用于嘧啶核苷酸位置酶切单链或双链DNA,主要用于缺口平移法标记DNA、对蛋白-DNA复合物进行足迹法分析等。
核酸外切酶(exonuclease)是一类从线性DNA分子一端向另一端连续切割的酶,包括5'-3'外切酶和3'-5'外切酶,它们分别从5'端向3'端切割或者从3'端向5'端切割,每次只切去一个核苷酸,也可以类似方式切割RNA。
核酸外切酶Ⅲnew能专一从双链DNA3'端去除核苷酸,该酶有多种活性,对无嘌呤DNA特异的核酸内切酶活性、3'磷酸酶活性、3'核酸外切酶活性、RNase H活性。该酶可催化双链DNA从3'-OH端逐一释放5'单核苷酸。主要用于:在以Klenow酶制备特异探针时,通过其3'-5'外切酶活性使双链DNA产生单链区,作为标记的底物制备单向缺失DNA分子进行平末端连接克隆;在定点诱变时,用于特异降解模板链,提高突变率。