5.4 紫外分光光度法对红茂草制剂质量的检测
5.4.1 材料与方法
（1）材料
①仪器与试剂
UV-751GD型紫外-可见光分光光度计（上海分析仪器厂）、RE52-99型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）、AB104-S型精密电子分析天平（瑞士梅特勤公司）、SH8-Ⅲ型循环水式多用真空泵、超声波清洗仪、索氏提取器、pH计等。
异紫堇碱标准品（购自ABCR Gmbh & Co.KG im Schlehert公司，批号166401，规格10mg）、无水乙醇、其余试剂均为国产或进口分析纯。
②样品
采自野外生长的红茂草，由王廷璞研究员鉴定，经自然风干、粉碎、过筛。红茂草注射液来自于天水市某医院药剂科。
（2）方法
以异紫堇碱为标准品，配制溶液绘制标准曲线，对照标准曲线测定样品中生物碱含量，并进行精密度、稳定性、重现性考察。
5.4.2 结果与分析
（1）测定方法及条件考察
①标准样品
本实验以红茂草中主要成分异紫堇碱作为标准品，进行相关实验检测。
②线形分析的考察
准确吸取红茂草生物碱标准样溶液（20mg/mL）各0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL、0.35mL，稀释成浓度为0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL、0.70mg/mL的梯度溶液，测其OD330值。并以浓度值对吸光度进行回归，得标准曲线方程Y=1.0236X+0.1559，R2=0.9998。并以浓度值对吸光度作图，得一条直线，如图5-16所示。
图5-16 红茂草标准品吸光度曲线
③样品溶液的制备
精密称取15g红茂草粉，置于500mL的烧瓶中，分别加入400mL不同的溶剂，超声处理1h，抽滤、浓缩、定容至100mL，吸取100μL，稀释至10mL，测其OD330，结果如表5-13所示。
表5-13 红茂草醇溶与水溶提取物生物碱含量比较
对醇溶与水溶提取液生物碱含量进行方差分析，结果如表5-14所示。
表5-14 方差分析表
①表示极显著。
方差分析（表5-14）结果显示P<0.01，说明两种方法差异性极显著，建议在工业化生产中使用醇溶法。
④精密度考察
精密吸取醇溶样品（批号1211101），进行测定。结果如表5-15所示。
表5-15 精密度实验结果
精密度实验结果（n=3），实验表明，该方法的精密度良好。
⑤稳定性实验 精密吸取不同时间的醇溶样品，分别进行测定，结果如表5-16所示。
表5-16 稳定性实验结果
稳定性实验结果（n=3），结果表明，该样品在2年内稳定。
⑥重现性实验
精密吸取醇溶样品（批号1211101），进行测定，其结果如表5-17所示。
表5-17 重现性实验结果
重现性实验结果（n=3），结果表明该方法的重现性良好。
（2）样品的测定
①红茂草注射液的测定
精密吸取醇溶样品100μL，置于10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光光度法在330nm处测定吸光度，其结果如表5-18所示。
表5-18 红茂草注射液中生物碱测定结果
红茂草注射液中生物碱测定结果（n=3）根据测定结果，本品中生物碱含量不得少于7.0mg/支。
②红茂草提取物的测定
以上述方法对红茂草提取物进行测定，其结果如表5-19所示。
表5-19 红茂草提取物中生物碱测定结果
按紫外分光光度法测定，红茂草提取物中生物碱含量不得少于3%。
5.4.3 结论
本实验采用紫外-可见光分光光度计法，以红茂草中主要成分异紫堇碱作为标准品，对红茂草提取物、红茂草注射液等试样中生物碱的含量进行了测定。建议依据制剂工艺的研究及有关规定的要求，红茂草注射液确定每支装2mL；用法与用量为肌肉注射，一次2～4mL，每日1次；依据制剂的贮藏要求确定为密封置阴，干燥处保存。该研究为红茂草制剂的制备、提取，以及临床应用提供了依据。