为了证实前面的信息是如何应用于实验室，下面将以实例进行描述。此实例是关于血清葡萄糖测定方法的评价。

在常规工作时间以外的时间需要快速确定血清葡萄糖的方法。样本体积为0.2ml或更小，分析范围为0～27.5mmol/L，周转时间为20分钟对于急诊特定样本申请是期望的。短的周转时间意味着由于糖酵解作用葡萄糖的损失将没有意义。

葡萄糖分析的医学决定性水平认为是2.75mmol/L和11mmol/L分别指示为低血糖和高血糖。因为程序用于第一班工作时间以外，没有包括通常用于筛查(6.93mmol/L)的决定性水平。葡萄糖精密度规范(表11-2)定为在2.75mmol/L时的0.0825mmol/L和在11mmol/L时的0.275mmol/L。总误差规范(TEa)是2.75mmol/L时的0.33mmol/L和11mmol/L时的1.1mmol/L。

对可提供方法的调查后，选择的试验方法以试剂盒方式提供，可用于建立现在的实验室仪器。指派专门检验人员执行评价研究，并规定具体的实验时间。

获得试剂盒和一级参考物质后，建立方法并运行。一级参考溶液用于校准。用实验控制物和随机选择的临床标本进行几批的检测。

从贮备的葡萄糖一级参考溶液(55mmol/L)制备一系列的葡萄糖溶液进行双份检测来确定线性范围。图11-6以图形方式表述结果。图形显示出到33mmol/L的良好的线性，其满足到27.5mmol/L的线性规范。在零葡萄糖浓度的吸光度值是试剂空白值，其是可复现的及满意地低的，因此省去这一空白吸光度应不是误差的显著性来源。

对每一低到不正常控制物和中度高到不正常控制物分析20等份样本执行批内重复性试验。各自的平均值和标准差是低浓度控制物为3.11±0.0385mmol/L，高浓度控制物为10.04±0.116mmol/L。当与允许的标准差0.0825mmol/L和0.275mmol/L进行比较时，这些标准差是可接受的。

制备两份混合血清样本作为基线标本。制备浓缩的葡萄糖溶液使得标准加入将不使血清稀释明显。加入两种不同葡萄糖量。向9.6ml的混合血清中加入0μl、100μl或400μl具有浓度为55mmol/L的葡萄糖溶液，再分别加入400μl、300μl或0μl 0.15mol/L的氯化钠溶液，每一情况最后的体积为10.0ml。执行四次重复检测，并计算每一标本四个单独值的平均值(表11-4)。通过测量值减去各自原混合血清含量(3.355mmol/L和9.405mmol/L)确定回收量。百分回收是回收量除以加入量乘以100获得。这些单个回收的平均值给出98%回收的估计，其相当于2%的比例误差，或在2.75mmol/L时实际误差为0.055mmol/L，11mmol/L时实际误差为0.22mmol/L。这些误差小于允许总误差，因此分析目标有效。

通过重复地检测空白溶液(溶液包含非分析物，如果可能，基质，如血清应与用于试验的一样)获得的空白值x _bl，标准差s _bl来估计检出限。计算检出限为x _L:

其中k值为2给出了95%的置信限。

使用新方法和已知无这样干扰建立的方法同时检测一系列黄疸、混浊和溶血的血清来检验明显不正常样本的潜在的干扰(表11-5)。(注意这种方法不是经典的检验干扰的试验，其涉及直接加入干扰物质，并测量其效果;在此使用比较的方法是因为将这些物质加入混合血清的局限性)。两种方法在5.5mmol/L到7.7mmol/L获得葡萄糖结果的差值是0.055mmol/L到0.22mmol/L，将其与允许总误差相比较判断其是可接受的。

通过加入少量高浓度的溶液到一大量混合血清中可检验其他可能的干扰。在6.6mmol/L浓度下与基线值的平均差值是0～0.165mmol/L(表11-6)。这些差值小于允许总误差，因此并没有限制方法的适用性。程序是否适用于肝素或其他类型的血浆的检测也可以通过适当地分割一些血样本来进行检验。

每天分析两种质量控制混合血清共20天，得出的平均值和标准差分别为:低浓度平均值为2.89mmol/L，标准差为0.066mmol/L;高浓度的平均值为10.15mmol/L，标准差为0.171mmol/L。与可接受的标准差0.0825mmol/L和0.275mmol/L相比较，观察的精密度分别是可接受的。

证明可靠性的方法可用于比较的目的。由试验和比较方法同时双份检测114份患者血清标本。对每一方法计算双份结果的平均值，并将试验方法的均值作为y轴，比较方法平均值作为x轴绘制图形(图11-7)。该图显示的是葡萄糖浓度在分析范围内具有合理的分布。

回归分析给出如下统计数据:斜率= 0.982，y截距= 0.066mmol/L，标准误(s _y/x)= 0.231mmol/L，及相关系数= 0.98。这些统计量的解释如下:斜率接近于1.00，显示出的比例分析误差是1.8%;这种误差估计相当于在2.75mmol/L为－0.0495mmol/L，在11mmol/L时为－0.198mmol/L。Y轴截距接近于0，表明有0.066mmol/L的小的固定系统误差。数据离散或随机差值大小(两方法双份测定平均值之差)被估计为点围绕回归线的标准差为0.231mmol/L。这一统计量显示出双份测定平均值的差值覆盖范围为0.44～0.495mmol/L。但是单个测量值之间的差值会稍高一些。相关系数的高值证实已研究的浓度范围很宽，及指出简单线性回归对于分析这样一组数据是满意的。

基于这些数据，为了判断方法的可接受性，必须在决定性水平估计系统误差。例如，在2.75mmol/L决定性水平的系统误差为0.0165mmol/L，y _C= 0.066+ 0.982×2.75= 2.77。在11mmol/L决定性水平的系统误差为0.132mmol/L，y _C= 0.066+ 0.982×11= 10.87。注意固定和比例分量是相反的方向，并且它们的效果在研究的浓度水平上稍微有些平衡作用。因此，系统误差是较小的，并且小于规定的允许总误差，当使用准确度时判断方法性能是可接受的。

为了应用总误差准则，对日间精密度标准差研究也应有要求(TE= SE+RE，其中RE估计为4倍的日间标准差)。在2.75mmol/L时的总误差为0.28mmol/L［0.0165+ 4× 0.066］，在11mmol/L时总误差为0.814mmol/L［0.132+ 4×0.17］。与可允许的总误差(TEa)0.33mmol/L和1.1mmol/L相比较，这些观察的总误差也是可接受的。

确定了分析性能是可接受的后，需要执行其他的研究来确定试剂的稳定性和可复现性。对于选定的群体验证参考区间，并且期望接近参考方法的区间，因为具有很小的系统误差。

对于其他的检测项目和非血清标本，执行的评价程序可能更严格。例如，当检测酶时，回收试验几乎是不可行的。对于昂贵的试验如免疫检测或复杂程序如电泳，分析人员可能处理少量的标本。对于脑脊液标本，由于提供的量有限，有些检测如精密度、干扰和样本交互作用可用参考溶液来模拟生物材料进行试验。但不管应用这些指南如何修改，基本的说明仍然是在方法引入到实验室之前必须由实际的试验建立方法的可靠性。

详细内容可参考本作者主编的《临床检验方法确认与性能》一书。