第三节 肉牛繁殖新技术
一、人工授精技术
（一）人工授精的优点
牛的配种方法可分为自由交配、人工辅助交配和人工授精三种。目前，很多地方采用冷冻精液人工授精的配种方法。
肉牛人工授精，可以克服母牛生殖道异常不易受孕的困难。使用人工授精，可提供完整的配种记录，有助于分析母牛不孕的原因，帮助提高受胎率。由于精液可以保存，尤其是冷冻精液保存的时间很长，可以将精液运输到很远的地方，因此，公、母牛的配种可以不受地域的限制，尤其是优秀种公牛的精液，如果输送到很远的地方，可以有效地解决种公牛质劣地区的母牛配种问题。
人工授精，可以大幅度提高种公牛的配种效率，特别是在使用冷冻精液的情况下，在自然交配状态下，1头公牛每年可负担40～100头母牛的配种任务，而采用人工授精，1头公牛每年可配母牛3000头以上，甚至可配上万头母牛。人工授精，可以选择最优秀的种公牛用于配种，充分发挥其性能，达到迅速改良牛群的目的，同时相应减少了种公牛的饲养数量，有效节约饲养管理费用。人工授精，可以防止自然交配引起的疾病传播，特别是生殖道传染病的传播，而每次人工授精前都要进行发情鉴定和生殖器官检查，对阴道炎、子宫内膜炎及卵巢囊肿等疾病而言，可以做到及早发现、及时治疗。人工授精时，使用的都是合乎要求的精液，通过发情鉴定正确掌握输精时间，并且会把精液直接输送到子宫颈内，这样能保证较高的受胎率。在自然交配情况下，如果使用体型大的肉牛改良体型小的肉牛时，往往会出现体格相差太大不易交配的困难，使用人工授精，则不会有这样的情况出现。
当然，人工授精必须使用经过后裔鉴定的优良种公牛。假如使用遗传上有缺陷的公牛，造成的危害范围会比本交更大；同时，人工授精要求严格遵守操作规程、严格进行消毒，还必须有技术熟练的操作人员。
（二）人工授精的方法
1.输精技术
肉牛人工授精技术可分两类共三种方法：第一类为冷冻精液人工授精技术，第二类为液态精液人工授精技术。液态精液人工授精又分为两种方法，第一种是鲜精或低倍稀释精液［1∶（2～4）］人工授精技术，1头公牛每年可配母牛500～1000只以上，比用公牛本交进步10～20倍以上，用这种技术，将采出的精液不稀释或低倍稀释，立刻给母牛输精，适用于母牛季节性发情较显著而且数目较多的地区；第二种是精液高倍稀释［1∶（20～50）］人工授精技术，1头公牛每年可配种母牛10000只以上，比本交进步200倍以上。
2.输精时间
（1）初次输精 母牛体成熟比性成熟晚，通常育成母牛的初次输精（配种）适龄为18月龄，或达到成年母牛体重的70%（300～400千克）为宜。
（2）产后输精 通常在产后60天左右开始观察发情表现，经鉴定，若发情正常，即可以配种。但也有产后35～40天第一次发情正常的，遇到类似的情况也可以配种，这样可缩短产犊间隔时间，提高繁殖率。
（3）适时输精 由于母牛正常排卵是在发情结束后12～15小时，所以，输精时间安排在发情中期至末期阶段比较适宜。第一次输精时间应视发情表现而定，上午8：00以前发情的母牛，在当日下午输精；8：00～14：00发情的母牛，在当日晚上输精；14：00以后发情的母牛，在翌日早晨输精。第一次输精后，间隔8～12小时进行第二次输精。
3.操作要点
（1）输精技术 输精的操作技术通常有两种，即阴道开张法和直肠把握法。
阴道开张法需要使用开膣器。将开膣器插入母牛阴道内打开，借助反光镜或手电筒光线，找到子宫颈外口，将输精器吸好精液，插入到子宫颈外口内1～2厘米，注入精液，取出输精器和开膣器。阴道开张法的优点是操作的技术难度不大，缺点则是受胎率不高，目前已很少使用。
目前，生产中主要采用直肠把握法进行子宫颈输精。把母牛保定在配种架内（已习惯直肠检查的母牛可在槽上进行），将牛尾巴用细绳拴好拉向一侧。术者一手戴产科手套，涂抹皂液，将手臂伸入直肠内，掏出粪便，然后清洗消毒外阴部，擦干，用手在直肠内摸到子宫颈，把子宫颈外口处握在手中，另一手持已装好精液的输精枪，从阴门插入5～10厘米，再稍向前下插入到子宫颈口外，两手配合，让输精器轻轻插入子宫颈深部（经过2～3个皱褶），随后缓慢注入精液，然后缓慢抽出输精枪。操作时动作要谨慎，防止损伤子宫颈和子宫体，在输精操作前，要确定是空怀发情牛，否则会导致母牛流产。输精结束后，先将输精枪取出，直肠里的手按压子宫颈片刻后再取出，然后再轻轻按摩阴蒂数秒钟。
（2）输精深度 试验结果表明，子宫颈深部、子宫体、子宫角等不同部位输精的受胎率没有显著差别，子宫颈深部输精的受胎率是62.4%～66.2%，子宫体输精的受胎率是64.6%～65.7%，子宫角输精的受胎率是62.6%～67%。输精部位并非越深越好，越深越容易引起子宫感染或损伤，所以，采取子宫颈深部输精是安全可靠的方法。
（3）输精数量 输精量一般为1毫升。新鲜精液一次输精含有精子数约1亿个以上。冷冻精液输精量，安瓿和颗粒均为1毫升，塑料细管以0.5毫升或0.25毫升较多。要求精液中含前进运动精子数1500万～3000万个。
4.正确解冻
冷冻精液需要储存在-196℃的液氮罐中。当从储存冷冻精液的液氮中取出冷冻精液时，应将冷冻精液迅速解冻。解冻用38℃的热水。先将杯中或盒内的水温调节在38℃，然后用镊子（要先预冷）夹出细管冻精，迅速竖放或平放埋入热水中，并轻微摇荡几下，待冻精溶解（约30秒钟）后取出，用药棉擦干细管外壁，用消毒剪刀剪去封口端，活力镜检合格后，方可用于输精。
液氮罐应放在阴凉处，室内要通风，注意不要用不卫生工具污染罐内液氮，及时补充液氮，保证液氮面的高度应高于储存的冻精，最好将精液沉至罐底。冷冻精液取出后应及时盖好罐塞，为减少液氮消耗，罐口可用毛巾围住。取冻精的金属镊子用前需插入液氮罐颈口内先预冷1分钟。从液氮罐中取冷冻精液时，提筒不能高于液氮罐口，应在液氮罐口水平线下，停留时间不应超过5秒钟，需继续操作时，可将提筒浸入液氮后再提起。
二、同期发情技术
同期发情技术，是在人工干预下，适当调整母牛的生殖周期，让所有母牛在同一时间内发情排卵，达到统一饲养管理、统一组织生产的目的。
（一）同期发情的优点
1.有利于人工授精
同期发情，可以使母牛生产的各个环节都能按计划分期分批进行。尤其是集中发情和集中输精，不仅免去了母牛发情鉴定的繁琐工作，同时也减少了因分散输精所造成的人力和物力的浪费。对于鲜活胚胎移植的供体母牛和受体母牛来说，同期发情更是绝对的必要条件，可以说，没有同期发情，就无法进行胚胎移植。
2.便于组织生产
利用肉牛同期发情技术，可以对大群母牛分批进行配种。在人工干预下，控制范围内母牛的妊娠、分娩乃至犊牛的培育，在时间上都会趋于一致，这样不仅便于有计划地组织生产，还能节约劳力和费用，降低生产成本，提高经济效益。对于工厂化养牛来说，同期发情技术意义重大。
3.提高肉牛繁殖率
同期发情技术，不但适用于周期性的发情母牛，也能使处于乏情状态的母牛出现正常的发情周期。例如，采用孕激素进行同期发情处理，可使多数因卵巢静止而乏情的母牛表现出发情症状；而采用前列腺素进行同期发情处理，可溶解母牛黄体，使因存在持久黄体而长期不发情的母牛恢复繁殖力。所以，同期发情能大幅度提高肉牛的繁殖率。
（二）同期发情的机理
从卵巢机能和形态变化方面看，母牛的发情周期可分为卵泡期和黄体期两个阶段。卵巢期是在周期性黄体退化继而血液中孕酮水平显著下降后，卵巢中卵泡迅速生长发育，最后成熟并导致排卵的时期。卵泡期一般是从周期第18天到第21天。卵泡破裂排卵后，原卵泡处发育成黄体，随即进入黄体期。黄体期内，在黄体分泌的孕激素的作用下，其他卵泡的发育受到抑制，母牛不表现发情，在未受精的情况下，黄体维持约15～17天，黄体退化后进入另一个卵泡期。黄体期一般从周期第1天到第17天。
相对高的孕激素水平，可以抑制卵泡的发育和母牛的发情。黄体期的结束，就是卵泡期到来的前提条件。因此，同期发情的关键，就是控制黄体寿命并同时终止黄体期。
同期发情技术有两种方法。一种是向母牛群同时施用孕激素，抑制卵泡的发育和母牛的发情，经过一定时期后同时停药，即可使牛群在同一时间内发情。使用这种方法的原理，是利用外源孕激素代替内源孕激素（黄体分泌的孕激素），造成了人为黄体期，从而推迟发情期的到来。另一种方法是利用前列腺素F2α，使黄体溶解，中断黄体期，从而提前进入卵泡期，使发情期提前到来。
（三）同期发情的方法
1.孕激素处理法
如前所述，使用孕激素处理的目的是人为地造成黄体期，从而达到控制发情。处理一定时间后同时停药，即可引起母牛发情。常用的孕激素，主要包括孕酮及其合成类似物，如甲孕酮、炔诺酮、氯地孕酮、18-甲基炔诺酮等。投药方式有阴道栓塞法、皮下埋植法等。
（1）皮下埋植法 将一定量的孕激素制剂，装入管壁有小孔的塑料细管中，利用套管针或者专门的埋植器，将药管埋入母牛耳背皮下，经过一定天数后，在埋植处作切口，将药管挤出，同时，注射孕马血清促性腺激素（PMSG）500～800国际单位。也可将药物装入硅橡胶管中埋植。硅橡胶有微孔，药物可渗出。药物用量依种类而不同，18-甲基炔诺酮为15～25毫克。用药期一般为16～20天，处理后的牛群4～5天发情。
（2）阴道栓塞法 栓塞物可用泡沫塑料块或硅橡胶环，后者为一螺旋状钢片，表面敷以硅橡胶。它们包含一定量的孕激素制剂。将栓塞物放在子宫颈外口处，其中的激素即可慢慢渗出。处理结束后，将其取出即可，或同时注射孕马血清促性腺激素。
孕激素的处理有短期（9～12天）和长期（16～18天）两种。长期处理后，发情同期率较高，但受胎率较低；短期处理后，发情同期率较低，而受胎率接近或相当于正常水平。如在短期处理开始时，肌注3～5毫克雌二醇（可使黄体提前消退和抑制新黄体形成）及50～250毫克的孕酮（阻止即将发生的排卵），这样就可提高发情同期化的程度。但由于使用了雌二醇，故投药后数日内母牛出现发情表现，但并非真正的发情，故此时不要授精。使用硅橡胶环时，环内附有一胶囊，内装上述量的雌二醇和孕酮，以代替注射。孕激素处理结束后，在第2～4天内，大多数母牛有卵泡发育并排卵。
2.前列腺素（PG）及其类似物处理法
使用前列腺素及其类似物，可以溶解卵巢上的黄体，从而中断周期黄体的发育，使母牛群在同一时间内发情。
前列腺素处理法，只有当母牛在周期第5～18天（有功能黄体时期）才能产生发情反应。对于周期第5天以前的黄体，前列腺素并无溶解作用。因此，用前列腺素处理后，总有少数母牛没有反应，这些母牛需进行二次处理。有时，为使一群母牛具有最大程度的同期发情率，在第一次处理后，表现发情的母牛不予配种，经10～12天后，再对全群牛进行第二次处理，这时，所有的母牛均处于周期第5～18天之内。故第二次处理后，母牛同期发情率显著提高。
前列腺素的投药方式有肌内注射法、宫腔（宫颈）注入法。子宫灌注时，前列腺素的用量为0.5～1毫克，每天1次，共2天；肌内注射需加大剂量。用药后，再注射100微克促性腺激素释放激素，效果会更好。
三、超数排卵技术
（一）超数排卵的意义
超数排卵简称为“超排”，就是在发情周期的适当时间注射外源促性腺激素，使母牛卵巢上多个卵泡同时发育，并且能同时或准时排出多个具有受精能力的卵子。超排的主要意义在于诱发母牛产双胎，可充分发挥优良母牛的作用，加速牛群改良进度。在一个情期内，肉牛卵巢上一般只有一个卵泡发育成熟并排卵，授精后只产一头犊牛。若进行超排处理，可诱发多个卵泡发育，增加受胎比例，提高繁殖率。同时，胚胎的冷冻保存，可以使胚胎移植跨地域跨时空进行，大大节约购买和运输活牛的费用，还可以从养母处得到免疫能力，更容易适应本地区的生态环境。在胚胎移植技术程序中，超排已成为不可或缺的重要环节。
（二）超数排卵的方法
用于超数排卵的外源激素，大体上可以分为两大类：一类能促进卵泡生长发育，另一类能促进排卵。前者主要有孕马血清促性腺激素（PMSG）和促卵泡素（FSH）；后者主要有人绒毛膜促性腺激素（HCG）和促黄体素（LH）。另外，生产上还常常配合使用其他激素，如人前列腺素F2α（PGF2α）、促性腺激素释放激素（GnRH）、促排卵素（LRH，也叫促黄体素释放激素）等。常用的超排处理方法主要有如下几种。
1. PMSG+PGF2α法
在性周期第8～12天内，1次肌注PMSG2000～3000IU（老年牛剂量可大一些），48小时后肌注PGF2α15～25毫克，或子宫灌注2～3毫克，以后的2～4天内，多数母牛发情。但PMSG不宜与PGF2α同时注射，否则会导致排卵率降低。
2.FSH+PGF2α法
在性周期第8～12天内1次肌注FSH，每日2次，连注3～4天，总剂量30～40毫克（第一次用量稍多，以后逐日降低），在第五次注射的同时，注射PGF2α15～25毫克。在有必要的情况下，可在牛发情后肌注GnRH（也可用LRH-A2或LRH-A3）200～300微克。
（三）超排需要注意的问题
1.巩固处理效果
经超排处理的供体，卵巢上发育的卵泡数要多于自然发情的卵子数，若仅仅依靠内源性促排卵激素，往往不能达到超排的目的。因此，在供体母牛出现发情症状时，需要静脉注射外源性HCG或GnRH、LH等，以增强排卵效果，减少卵巢上残余的卵泡数。用孕激素作超排预处理，可以提高母牛对促性腺激素的敏感性。
2.避免反应减退
超排应用的PMSG、HCG、FSH及LH等均为大分子蛋白质制剂，对母牛作反复多次注射后，体内会产生相应的抗体，卵巢的反应会逐渐减退，超排效果也随之降低。为了保持卵巢对激素的敏感性，可以更换另一种激素进行超排处理，以获得较好效果。
3.重视后续处理
为了减轻卵巢的负担，给供体母牛作第二次处理的间隔时期应为60～80天，第三次处理时间则需延长到100天。在每一次冲取胚胎结束后，应向子宫内灌注PGF2α，以加速卵巢功能的恢复。
（四）怎样让牛产双胎
牛是单胎动物，一般情况下，一次只能生一个牛犊，在自然条件下生双胞胎的概率只有十万分之一左右。牛的繁殖水平很低，这是制约肉牛业发展的重要因素。在科研人员的共同努力下，实验研究出了一些能够让母牛产双胎的繁殖技术，但因为牛个体差别很大，同样的激素剂量可能会出现不同的效果，所以，这些繁殖技术不是十分成熟，不能保证让母牛百分之百产双胎，但在生产上可以试用。常见的有如下几种方法。
1.促排卵素（LRH）法
LRH3号或LRH2号，在母牛发情输精前或输精后同时肌内注射20～40微克，1次即可。
2.绒毛膜促性腺激素（HCG）法
每头母牛肌注HCG2000～5000微克，隔7天后再注射2000～4000微克，第11天再注射2000微克，出现发情第2天上午输精，间隔8～10小时后再做第二次输精。
3.孕马血清（PMSG）法
在母牛发情周期第11天，肌内注射PMSG1200～1500IU，间隔2天后（第13天），肌注氯前列烯醇4毫升。发情后，在第一次输精的同时，肌注与前等量的抗PMSG，间隔12小时后，再输精1次。
四、胚胎移植技术
胚胎移植是指对经超数排卵处理的供体母牛用手术或非手术手段，从其输卵管或子宫内取出若干早期胚胎，移植到经过同期发情处理的另外一群受体母牛的相同部位，以达到产生供体牛后代的目的。我国胚胎移植技术起步较晚，最早开始于1973年，直到1978年，牛胚胎移植才获得成功。目前，国外鲜胚移植妊娠率可达60%以上，我国鲜胚移植受胎率可达50%～60%，冻胚移植受胎率为40%～45%。
（一）胚胎移植的意义
1.发挥优秀母牛的繁殖潜力，提高利用率和繁殖效率
就整体水平而言，由一头供体通过超排回收的胚胎，经移植可获得2～9头犊牛。而采用传统的自然交配和人工授精技术，一头优秀母牛一生最多只能生产10头左右的犊牛。因此，应用胚胎移植技术比自然情况下能增殖若干倍，从而可极大地增加优秀个体的后代数，充分发挥优秀母牛的遗传和繁殖潜力。
2.有效保存品种资源，建立良种基因库
应用胚胎的冷冻技术，可使优良品种牛或特殊品种牛和野生动物胚胎长期保存，以保护良种资源，需要时可随时解冻移植。胚胎移植与冷冻精液、冷冻卵母细胞一起，共同构成动物优良性状的基因库。许多国家通过建立动物胚胎库的方式保存良种资源，以防止某一地区的优良品种受各种因素的影响而发生绝种。
3.减少疾病传播，为种公牛生产提供便利
目前，许多国家和地区疫情发生比较严重，在进行繁殖和直接进口活畜过程中，通过接触等途径有可能传播传染病，从而加大引进活畜的风险。试验结果表明，牛的白血病病毒、口蹄疫病毒等，不会通过胚胎传染给受体牛或新生犊牛。同时，由于胚胎的透明带具有阻止细菌、病毒入侵的作用，只要做好工作，就可防止疾病传播。具体工作是做好卵母细胞体外受精的质量监控，严防精液受污染、阻止病原微生物进入胚胎生产过程；严格把握供体牛处理、胚胎收集过程的标准化程度，保护胚胎透明带的完整性和保证胚胎洗净，生产“无病原胚胎”；确保生物制品来源可靠、无污染，胚胎移植操作符合卫生标准。
牛胚胎移植技术在肉牛生产上的应用，将极大地提高优良个体的繁育能力，便于产生更多的优良后代，有利于良种牛群体的建立和扩大，有利于选种工作的进行和品种改良规划的实施，极大地加速肉牛的品种改良工作。目前，我国的肉牛生产水平与世界发达国家的差距还很大，单纯依靠购买国外肉牛来改良牛群，不但手续烦琐而且价格昂贵，增大了牛肉业生产成本和肉牛投资风险；进口优良冻精则在肉牛改良方面要花费更多的时间。引进具有优良遗传性能的胚胎则是风险小、投资少、见效快的良种引进捷径，在当前大力发展养牛业的大好形势下，应尽快将胚胎移植这一高技术成果产业化，促进我国养牛业的进一步发展。
（二）胚胎移植的方法
1.选择供体牛
具备遗传优势和育种价值，即产肉量高、肉质好的母牛，祖代中或本身产过双胎的个体较好；具有良好的繁殖力，既往繁殖史好，易配易孕，分娩顺利，无难产或胎衣不下现象；发情周期正常，发情征状明显；年龄（胎次）以4～7岁（2～5胎）的经产牛为宜；营养良好，体质健康，生殖器官正常，无繁殖疾病；卵巢活性正常，卵巢质地有弹性，黄体功能好。分娩70天后方可进行超排处理。超排前，供体牛血清孕酮含量3.0纳克/毫升或以上，总胆固醇含量140纳克/100毫升或以上，可作为选择供体牛的参考指标。
据统计，按上述标准严格选择供体牛，可获得超排率80%以上。
2.选择受体牛
通过观察发情，确定性周期正常、直肠检查无生殖疾患的健康母牛预留作受体。膘情较差者，提前补饲以增强机体机能；肥胖者，要考虑减料使之掉膘达到繁殖最佳状况。
具体主要包括以下要点：良好的健康状况，不能有任何影响繁殖性能的疾病，尤其是生殖器官要正常，输卵管、子宫无炎症；由于黄牛体格小，后躯狭窄，多为斜尻或尖尻，让其“借腹怀胎”易造成难产，所以，一般不选黄牛作受体；要求受体牛和供体牛在发情时间上要同期，或移植的胚胎日龄与受体发情期时间同步，供、受体母牛发情同步差在±24小时内；为保证母牛的正常体况，促使其尽早发情，哺乳牛应及早断奶；年龄（胎次）以3～5岁（1～3胎）的母牛为宜。
在进行胚胎移植的实验研究阶段，对受体的选择较为严格，相应受胎率也较高。据统计，严格选择受体牛，胚胎移植受胎率可达55%以上。
3.胚胎移植的操作过程
（1）采集胚胎 供体牛超排发情后的第7天，用2路或3路式采卵管进行非手术采卵。采卵管插入深度符合技术要求，即气囊要在小弯附近，离子宫角底部约10厘米。气囊的打气量为18～20毫升。冲卵液总量为1000毫升，每侧子宫角各500毫升，先冲超排效果较好的一侧子宫角，后冲另一侧子宫角。冲卵时，进液速度要慢，出液速度应快，先少量进液，再逐渐加大进液量，每次进液量范围在30～50毫升之间，防止冲卵液丢失。
为保证供体牛安静、便于操作，采卵前需注射静松灵1～1.5毫升。为防止污染，采卵管的前部不要用手触摸或碰触阴门外部。采卵后，供体牛应肌注氯前列烯醇（PG）0.4～0.6毫克，子宫灌注抗生素。
（2）胚胎检查
①处理集卵杯。把集卵杯内的回收液在室温18～22℃下静置20～30分钟，然后将上清液通过集卵漏斗慢慢清除，最后集卵杯内剩下30～50毫升回收液，摇动集卵杯将其倒入直径100毫米培养皿内。用PBS缓冲液［主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、吐温-20（吐温-20是一种表面活性剂，化学名称为聚氧乙烯失水山梨醇月桂酸酯，具有乳化、扩散、增溶、稳定等作用）］冲洗集卵杯壁2～3次，清洗液倒入集卵漏斗。另一侧子宫角回收液做同样处理。集卵漏斗最后保留20毫升左右液体，倒入另一直径100毫米培养皿中。
②观察胚胎。在显微镜下观察细胞是否紧密完整，有无游离细胞；胚胎的透明度是否正常，如变暗，说明细胞可能变性；细胞大小是否一致。
③胚胎分级标准。将胚胎分成A、B、C、D四个等级，其中A、B、C级胚胎为可用胚胎，D级胚胎为不可用胚胎。
（3）移植胚胎 移植胚胎一般在发情后第6～8天进行。移植前需要麻醉，常用2%普鲁卡因或利多卡因5毫升，在荐椎与第一尾椎结合处或第一二尾椎结合处施行麻醉。将装有胚胎的吸管装入移植枪内，用直肠把握法，通过子宫颈将移植枪插入子宫角深部，注入胚胎。
4.胚胎移植的影响因素
（1）操作手法的影响 移植手法稳、轻、快，可使子宫颈受刺激尽可能减少，同时防止子宫平滑肌产生不利的逆蠕动，进而影响体内生殖激素的变化引起不适宜怀孕的反应。手法的轻柔还可使子宫颈、子宫免受损伤，损伤内膜后，上皮细胞脱落，甚至有出血现象发生。如果上皮细胞、红细胞、白细胞等进入宫腔，可反射性地引起子宫自净功能活动增强，胚胎会同组织碎片、各种细胞等一起被排除；血液是有活性的，进入宫腔内的血液对胚胎也有毒害作用，所以，子宫出血会使受胚率大大降低。胚胎移植除需熟练进行胚胎室内操作的专业人员外，更不可缺少掌握过硬本领的人工授精技术人员。
（2）季节的影响 因解冻后的胚胎一般要在现场进行移植，所以胚胎移植结果受到季节因素的影响。在我国北方地区，10月末到4月末气温较低，15℃以下的温度，将对胚胎造成低温打击。而在7～8月，气温较高，母牛的代谢等发生变化，胚胎移植的死亡率相应增加。所以，我国北方地区最适胚胎移植季节为5～6月和9～10月。
（3）时间的影响 胚胎采集和移植的期限（胚胎的日龄）不能超过周期黄体的寿命，最快要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常在供体发情配种后3～8天收集胚胎，受体同时接受移植。
五、其他新技术
（一）胚胎体外生产技术
胚胎体外生产是相对于超数排卵体内生产胚胎而言的，是指卵母细胞在体外成熟后，与获能的精子受精并分裂发育到桑椹胚或囊胚期（5～7天）的技术，包括卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）和体外培养（IVC）。体外生产的胚胎也称IVF胚胎，目前，20多种哺乳动物体外受精获得成功，其中，牛已产出正常后代。体外受精可大量利用卵巢内的卵子，提供更多的低成本胚胎，并且IVF胚胎可以冷冻保存，在肉牛业中，该项技术有着广泛的应用前景。但是，目前IVF胚胎的移植妊娠率还比较低，尤其是冷冻后胚胎移植妊娠率更低，限制了其在生产中的大规模应用。
（二）精子分离技术
精子分离技术的根本意义在于人工干预家畜性别。XY精子分类技术是目前世界上生物领域最先进的良种繁育技术。XY精子的授精成活率已达到65%，XY精子的分离成功率已达到93%，这意味着利用分离的X精液，母牛的出生率也将达到90%以上。
家畜的精液中含有X和Y两类精子，而X精子体积和重量比Y精子大。经测定，牛的X和Y染色体面积各为7.85平方微米和3.47平方微米，两种精子的DNA含量差异范围为2.4%～4.5%。因此，可以根据X精子和Y精子的DNA含量、电荷、体积、重量或相对密度等差异，将X精子和Y精子分离开来。主要方法有沉淀法、密度梯度离心法、电泳法、柱层析分离法、流式细胞分离器分离法及H-Y抗原法等。