5.9　红茂草生物碱化学成分的分离与鉴定

5.9.1　材料与方法

（1）材料

①药材来源及鉴定

红茂草原植物2008年5月采自甘肃，由兰州大学马志刚教授鉴定为原植物，植物标本（No.ZY200802）保存于中国科学院兰州化学物理研究所，甘肃省天然药物研究重点实验室。

②测试仪器及试剂

a.仪器：

熔点（mp）　X-4数字显微熔点测定仪（Varian Inova-400）；

旋光　341（Perkin Eimer）旋光仪，溶剂为甲醇；

紫外UV　Shimadzu UV-240紫外仪；

红外IR　Nicolet NEXUS 670 FT-IR；

核磁1D NMR和2D NMR　Varian INOVA-400MHz核磁共振仪，溶剂为CDCl3或DMSO-d6；

高分辨质谱HR-ESI-MS　Bruker APEX II；

X-射线衍射　Bruker D8 SMART APEX II。

b.试剂：

石油醚（60～90℃）、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇为重蒸工业试剂；水为自制蒸馏水。柱色谱硅胶（200～300目）、薄层色谱硅胶（GF254）均为青岛海洋化工厂产品，所用试剂均为分析纯。

（2）方法

①生物碱的提取分离

取干燥红茂草（5.0kg）粉碎，用95%乙醇提取3次（每次7d），减压回收溶剂，得浸膏200.0g。浸膏混悬于2000mL 2%H2SO4水溶液中，依次氯仿萃取部分FA（12g），水溶液pH值用氨水调制9，氯仿萃取，萃取物FB（25g），FB用硅胶25g拌样，500g硅胶上柱，氯仿-甲醇-三乙胺（10∶1∶0.1到2∶1∶0.1）梯度洗脱，流速，10mL/min，薄层色谱检测，合并相同组分，得4个组分，FB1（5000mL，4.0g，100∶1），FB2（4000mL，4.0g，50∶1），FB3（5000mL，2.0g，25∶1）和FB4（3000mL，3.5g，5∶1）；FB1以40g硅胶，氯仿-甲醇-三乙胺（20∶1∶0.1）为洗脱液，上柱洗脱，得化合物1（6mg）和化合物2（8mg）；FB2以50g硅胶，氯仿-甲醇-三乙胺（10∶1∶0.1）为洗脱液重新柱色谱分离得到化合物3（10mg），化合物10（12mg）和4（7mg）；FB3以30g硅胶，氯仿-甲醇-三乙胺（8∶1∶0.1）为洗脱液重新柱色谱分离得到化合物5（34mg），化合物6（9mg）和化合物7（11mg）；FB4以50g硅胶，氯仿-甲醇-三乙胺（6∶1∶0.1）为洗脱液重新柱色谱分离得到化合物7（10mg），化合物8、9（12mg）和11（10mg）。

②异紫堇碱（化合物5）单晶衍射（X-Ray）实验

a.原料　柱色谱分离得到异紫堇碱纯品15mg，经TLC和NMR鉴别为单一纯净目标化合物。

b.单晶培养条件　10mL青霉素小瓶，用3mL甲醇，加入0.1mL氢溴酸，将异紫堇碱溶解，半开口放置于4℃冰箱中30d形成棱柱状单晶。

c.单晶衍射实验　用Bruker APEX Ⅱ面探测仪收集衍射强度数据，MoKα辐射，石墨单色器，晶体与IP板距离d=100mm，管压50kV，管流20mA，ω扫描，最大2θ角为50.0°，扫描范围为0～180°，回摆角度为5°，间隔为5°，扫描速度为1.5°/min，独立衍射点为11009个，可观察点（|F|2≥3σ|F|2）为3925个。在微机上用直接法解析晶体结构，从E图上获得全部非氢原子位置，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，使用几何计算法和差值Fourier法获得全部氢原子位置。

5.9.2　结果与分析

（1）红茂草全草中分离的生物碱成分

红茂草全草中分离的生物碱成分的中英文名见表5-29，化学结构如图5-37。

（2）各化合物的物理常数和谱学数据

化合物1：无色结晶，1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.66（1H，d，J=8.4Hz，H-11），7.65（1H，s，H-4），7.47（1H，d，J=8.4Hz，H-12），7.28（1H，d，J=8.0Hz，H-10），7.09（1H，s，H-1），6.83（1H，d，J=8.0Hz，H-9），6.03（4H，d，J=5.2Hz，—O—CH2—O—），4.19（2H，s，H-6），2.61（3H，s，H—N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：104.3（C-1），148.1（C-2），147.5（C-3），100.7（C-4），126.5（C-4a），142.5（C-4b），48.4（C-6），113.6（C-6a），144.6（C-7），147.1（C-8），107.2（C-9），116.2（C-10），127.2（C-10a），124.4（C-10b），120.3（C-11），124.0（C-12），130.8（C-12a），101.0（2，3-OCH2O—），101.3（7，8-OCH2O—），41.5（N—CH3）。

化合物2：无色结晶，1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.67（1H，d，J=8.8Hz，H-11），7.51（1H，s，H-4），7.46（1H，d，J=8.8Hz，H-12），7.31（1H，d，J=8.0Hz，H-10），7.09（1H，s，H-1），6.84（1H，d，J=8.0Hz，H-9），6.03（4H，d，J=5.2Hz，—O—CH2—O—），4.85（2H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-6），2.62（3H，s，HNCH3），2.61（1H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-1'a），2.30（1H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-1'b），2.04（3H，s，3'-CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：104.2（C-1），148.2（C-2），147.6（C-3），100.6（C-4），127.4（C-4a），139.4（C-4b），54.4（C-6），116.0（C-6a），144.2（C-7），147.1（C-8），107.6（C-9），116.4（C-10），125.6（C-10a），123.4（C-10b），120.0（C-11），124.0（C-12），131.0（C-12a），101.0（2，3-OCH2O—），100.5（7，8-OCH2O—），46.6（C-1'），207.3（2'-CO—），43.0（N—CH3），31.3（3'-CH3）。

化合物3：白色柱状晶体，mp218～219℃，UV λmax（MeOH）（nm）：281，IR νmax（KBr） （cm-1）：3520，1882，1647，1628，1299；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.65（1H，s，H-5），6.83（1H，d，J=8.0Hz，H-2），6.64（1H，d，J=8.0Hz），6.20（1H，s，H-8），3.82（3H，s，3-OCH3），3.78（1H，d，J=5.2Hz，H-9），3.82（3H，s，6-OCH3），3.34（1H，d，J=17.6Hz，H-10b），2.93（1H，dd，J=17.6，5.6Hz，H-10a），2.56（1H，dd，J=12.5，3.0Hz，H-16a），2.42（1H，dd，J=12.5，3.0Hz，H-16b），2.38（3H，s，N—CH3），2.34（1H，m，H-15），1.72（1H，m，H-15）；13C-NMR[100MHz，CO（CD3）2]，δ：1118.5（C-1），110.0（C-2），146.2（C-3），143.9（C-4），120.6（C-5），150.8（C-6），80.3（C-7），121.7（C-8），60.6（C-9），32.2（C-10），129.6（C-11），124.3（C-12），43.4（C-13），161.8（C-14），37.2（C-15），46.7（C-16），55.6（3-OCH3），53.9（6-OCH3），40.8（N—CH3）。

化合物4：紫红色无定形粉末（甲醇），mp198～200℃；UV λmax（MeOH） （nm）：225，281，328；IR νmax（KBr） （cm-1）：2922，1640，1603，1564，1511，1087，1031，816；HRESI-MS m/z：354.1335[M]+（计算值C20H20NO5为354.1336）；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.94（1H，s，H-3），3.16（2H，t，J=6.4Hz，H-4），3.50（2H，t，J=6.4Hz，H-5），6.96（1H，s，H-8），5.91（1H，s，H-10），3.19（3H，s，N-CH3），3.98（3H，s，1-OCH3），3.88（3H，s，2-OCH3），3.95（3H，s，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：144.0（C-1），126.9（C-1a），119.4（C-1b），152.2（C-2），112.9（C-3），128.3（C-3a），29.3（C-4），50.3（C-5），150.3（C-6a），186.5（C-7），118.1（C-7a），98.3（C-8），178.4（C-9），105.2（C-10），163.9（C-11），136.5（C-11a），60.7（1-OCH3），56.5（2-OCH3），56.4（11-OCH3），40.2（N—CH3）。

化合物5：无色棱柱状结晶，185～186℃，Dragendorff试剂显橙红色；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.66（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.43（2H，m，H-5），2.67（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），2.82（1H，m，H-7），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7），6.79（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.82（1H，d，J=8.0Hz，H-9），2.49（3H，s，N—CH3），3.67（3H，s，1-OCH3），3.91（3H，s，2-OCH3），3.88（3H，s，10-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：142.0（C-1），125.8（C-1a），129.9（C-1b），151.2（C-2），111.0（C-3），129.2（C-3a），29.3（C-4），52.7（C-5），62.0（C-6a），35.9（C-7），129.9（C-7a），118.9（C-8），110.8（C-9），149.4（C-10），143.9（C-11），120.1（C-11a），62.8（1-OCH3），55.8（2-OCH3），55.4（11-OCH3），43.9（N—CH3）。

化合物6：白色柱状结晶，Dragendorff试剂显橙红色；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.95（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.62（2H，m，H-5），3.69（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），3.16（1H，m，H-7α），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7β），6.88（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.0Hz，H-9），3.15（3H，s，N—CH3），3.64（3H，s，2-OCH3），3.79（3H，s，10-OCH3），3.85（3H，s，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：143.7（C-1），122.9（C-1a），124.7（C-1b），152.4（C-2），111.6（C-3），126.2（C-3a），25.5（C-4），51.2（C-5），62.0（C-6a），31.7（C-7），126.9（C-7a），118.8（C-8），111.4（C-9），144.0（C-10），148.7（C-11），118.9（C-11a），61.6（2-OCH3），55.9（10-OCH3），61.2（11—OCH3），43.4（N—CH3）。

化合物7：白色结晶，Dragendorff试剂显橙红色；1H-NMR（400MHz，DMSO-d6），δ：6.62（1H，s，H-3），3.17（2H，m，H-4），3.03（2H，m，H-5），2.29（1H，t，J=13.2，2.0Hz，H-6a），3.16（1H，m，H-7α），2.67（1H，dd，J=13.2，2.0Hz，H-7β），6.77（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.63（1H，d，J=8.0Hz，H-9），2.61（3H，s，N—CH3），3.72（6H，s，1，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6），δ：144.2（C-1），121.8（C-1a），125.4（C-1b），149.0（C-2），110.0（C-3），128.3（C-3a），27.1（C-4），52.1（C-5），62.5（C-6a），34.0 （C-7），120.9（C-7a），116.7（C-8），110.3（C-9），149.0（C-10），145.9（C-11），120.4（C-11a），55.7（1-OCH3），55.5（11-OCH3），42.2（N—CH3）。

化合物8：白色粉末，Dragendorff试剂显橙红色；化合物8、9为一对应异构体，在1H-NMR谱中可以清晰看到二者的比例关系为1∶2，两个化合物在C-14位存在顺反异构，二者没有在TLC中得到分离，为一混合物，其HR-ESI-MS m/z 354.1174[M]+（计算值C20H20NO5为354.1336）；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.08（1H，s，H-1），6.83（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.89（2H，m，H-6），4.05（2H，d，J=17.6Hz，H-8），6.90（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.73（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.05（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16-OCH2O—），2.92（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：105.5（C-1），146.4（C-2），147.1（C-3），109.1（C-4），125.5（C-4a），22.9（C-5），52.5（C-6），54.2（C-8），62.4（C-8a），142.0（C-9），146.4（C-10），108.5（C-11），121.4（C-12），122.6（C-12a），38.5（C-13），92.4（C-14），127.4（C-14a），101.6（C-15，16），44.0（N—CH3）。

化合物9：化合物9与化合物8为一对应异构体；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.33（1H，s，H-1），6.89（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.86（2H，m，H-6），4.54（2H，d，J=6.4Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.82（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.08（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16-OCH2O—），3.32（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：106.2（C-1），147.0（C-2），148.1（C-3），108.1（C-4），123.2（C-4a），23.3（C-5），53.3（C-6），54.7（C-8），108.4（C-8a），143.5（C-9），145.6（C-10），108.2（C-11），121.9（C-12），122.2（C-12a），34.3（C-13），91.6（C-14），125.5（C-14a），101.8（C-15，16），42.1（N—CH3）。

化合物10：无色结晶，mp208～209℃，EI-MSm/z：353[M]+；IR νmax（KBr） （cm-1）：2789，1673，1613，1508，1084；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.88（1H，s，H-4），6.65（1H，d，J=8.4，Hz，H-11），6.64（1H，d，J=8.4Hz，H-12），6.62（1H，s，H-1），5.92（2H，s，—OCH2O—），5.90（2H，s，—OCH2O—），1.89（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：110.6（C-1），148.0（C-2），146.3（C-3），108.1（C-4），136.1（C-4a），31.7（C-5），57.8（C-6），50.8（C-8），117.8（C-8a），146.0（C-9），145.9（C-10），106.7（C-11），125.0（C-12），128.9（C-12a），46.4（C-13），194.1（C-14），132.7（C-14a），101.2（2，3-OCH2O—），100.8（9，10-OCH2O—），41.4（N—CH3）。

化合物11：白色结晶，mp162～165℃，IR νmax（KBr） （cm-1）：3423，2893，2788，1658，1620，1596，1501，1433，1340，1296；ESI-MS m/z：370[M+H]+；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.93（1H，s，H-4），6.89（1H，d，J=8.4，Hz，H-11），6.77（1H，d，J=8.4Hz，H-12），6.61（1H，s，H-1），5.92（2H，s，—OCH2O—），3.83（3H，s，10-OCH3），3.76（3H，s，9-OCH3），3.60（2H，s，H-8），3.32～3.46（2H，m，H-6），3.45～2.78（2H，m，H-5），1.90（2H，s，H-13），1.86（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：110.3（C-1），148.0（C-2），146.1（C-3），109.2（C-4），135.7（C-4a），32.2（C-5），57.4（C-6），50.3（C-8），128.4（C-8a），151.5（C-9），147.3（C-10），110.6（C-11），127.6（C-12），129.3（C-12a），46.0（C-13），192.8（C-14），132.6（C-14a），101.2（—OCH2O—），60.7（—OCH3），55.6（—OCH3），41.2（N—CH3）。

（3）异紫堇碱（化合物5）X-Ray实验结果

化合物5的单晶呈无色透明柱状，衍射实验用晶体体积大小为0.28mm×0.27mm×0.24mm，属正交晶系，空间群为P212121，晶胞参数：a=6.896（5）Å，b=11.586（8）Å，c=26.490（18）Å。晶胞体积V=2116（2）Å3，晶胞内分子数z=4。最终可靠因子Rf =0.0563，Rw =0.0915（w=1/σ|F|2）。最终确定不对称单位化学计量式为C20H23BrNO5，计算相对分子质量为437.30，计算晶体密度1.372mg/m3。异紫堇碱的X-Ray衍射晶体结构和晶胞堆积图，如图5-38、图5-39所示。其原子坐标参数及等价温度因子，以及成键参数见表5-30～表5-32。

5.9.3　结论

通过一系列检测，最终从红茂草药物中分离鉴定出11种生物碱：二氢血根碱、6-丙酮基-二氢血根碱、青风藤碱、秃疮花碱、异紫堇碱、紫堇碱、N-甲基莲叶桐文碱、反式普罗托品季铵盐、顺式普罗托品季铵盐、原阿片碱、别隐品碱。

化合物1：无色结晶，易溶于氯仿、丙酮。δH6.85（d，J=8.0，1H）、7.30（d，J=8.0，1H）、7.68（d，J=8.4，2H）、7.48（d，J=8.4，2H）表明化合物1具有2个苯环片段。由13C-NMR、DEPT可知化合物1有20个碳原子，3个亚甲基，11个季碳。故化合物1含20个碳原子，3个亚甲基，10个季碳。化合物核磁共振数据见表5-33，化合物1确定为二氢血根碱。

化合物2：无色结晶，喷改良的碘化铋钾后显示为橘红色斑点，有可能为生物碱类化合物。在δ2.61处一个单峰且包含3个氢，表明含有CH3，在d6.03处有1组峰且含4个氢，故可能为2组—OCH2O—，在d6.8～d7.7处为芳环上氢的特征信号：由δ6.85（1H，d，J=8.0Hz），δ7.30（1H，d，J=8.4Hz），δ7.46（1H，d，J=8.8Hz），δ7.68（1H，d，J=8.4Hz）可知芳环上有2组氢处于邻位。由13C-NMR及DEPT可知，该化合物含有3个亚甲基，10个季碳。该化合物的1H-NMR、13C-NMR测量值表5-34。

化合物2的骨架和二氢血根碱的骨架结构很相似，故通过与二氢血根碱13C-NMR文献值比较，即可确定化合物2中大部分碳所对应的化学位移值。其中C-6由于从CH2变为了CH，且受羰基吸电子效应的影响，故其化学位移向低场。2-羰基丁酮中3位上碳的化学位移为d45.2，化合物2的丙酮基中的仲碳（—CH2CO）所处位置与2-羰基丁酮3位上的碳类似，故其化学位移应为d46.6。以上数据与文献一致，化合物2确定为6-丙酮基-5，6-二氢血根碱。

化合物3（图5-40）　白色柱状晶体，mp218～219℃；碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性；UV在242nm，281nm有最大吸收，IR显示在3525cm-1，1882cm-1，1646cm-1处有最大吸收波长，提示该化合物带有酚羟基和羰基以及苯环管能团，13C-NNR高场区给出19个碳信号，DEPT区分该化合物具有3个亚甲基（CH2）信号，1个氮甲基信号（40.8），2个甲氧基信号，1个次甲基（CH）信号（60.6）和1个季碳信号（43.4），低场区4个芳环碳信号和7个芳环季碳信号，其中季碳信号中有1个为羰基碳信号，据此可以推断该化合物不具有两个芳香环骨架，所以可以推断该化合物不属于阿普菲类和苄基异喹啉类生物碱，可能属于防己碱或青风藤碱，不饱和区有2个共轭双键可以确定该化合物为青风藤碱。1H-NMR谱中低场区有1对偶合的芳环质子信号（6.83，1H，d，J=8.0Hz）和6.65，1H，d，J=8.0Hz，和2个单峰不饱和质子信号7.64（1H，s），6.20（1H，s）；其1H-NMR，13C-NMR数据与文献中青风藤碱的数据完全一致，故该化合物鉴定为青风藤碱，该化合物为首次从该属植物中分离得到（表5-35）。

化合物4　紫红色粉末状固体，碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性，高分辨质谱HRESI-MS给出分子式C20H19NO5（质荷比m/z为354.1335[M+H]+，计算值为C20H20NO5：354.1336）；红外光谱给出芳环官能团（1603cm-1，1564cm-1），碳氮双键伸缩振动（CN）信号为1680cm-1，共轭羰基官能团信号1640cm-1；紫外光谱在225（3.55）nm，281（2.78）nm和328（3.01）nm处有最大吸收波长，提示该化合物为阿普菲类生物碱类化合物。化合物4的1H-NMR提示有3个单峰芳香质子信号6.96（H-8），6.94（H-3），5.91（H-11），分别归属为H-8，3和H-11，三个甲氧基质子信号3.98（s，3H），3.95（s，3H）3.88（s，3H）和一个氮取代甲基信号3.19（s，3H），通过二维gCOSY谱可以确定有两个相邻的亚甲基质子信号化学位移分别在3.16和3.50，每组信号为3重峰，积分为2，提示有2个氢，偶合常数为6.4Hz，13C-NMR（表5-36）提示化合物除含有三个甲氧基和一个氮甲基信号（40.2）外，还有20个碳原子；化合物碳谱中低场区有一羰基碳信号186.5，提示该化合物羰基阿普菲类生物碱类化合物；在二维HMBC谱中甲氧基质子信号3.98，3.88和3.95与C-1（144.0），C-2（152.2）和C-11（163.9）有远程相关，故可以确定甲氧基的连接位置。H-3质子信号和2位甲氧基质子信号的NOESY相关可以确定C-2位的甲氧基连接位置，B环中碳氮双键的连接位置（CN）由H-5和C-3a，C-6a位置碳和氮甲基质子与C-5、C-6a位碳的HMBC远程相关确定；1H-NMR谱中在9～10位置没有羟基质子信号，IR谱中没有羟基伸缩振动峰，高分辨质谱都说明化合物1中C-9位羟基以及负离子形式存在；1H-NMR谱中C-10质子信号为5.91，比普通芳环质子处在较高场区，说明C-9位羟基副离子的供电子效应，H-10位质子信号位置可以由H-10和11-OMe质子的NOESY相关和H-10与C-10，9，11a的HMBC相关谱进一步确定；B环中C-4、5的连接位置由H-4与C-3a、3、1b以及H-5与C-3a、6a的HMBC相关确定；C-7位羰基的位置有H-8与C-7a、7的HMBC远程相关确定。这样化合物4的分子结构得以确定，命名为秃疮花碱，该化合物为一新化合物。其主要的HMBC和NOESY相关如图5-41所示。

化合物5（图5-42）　无色柱状结晶，mp185℃，碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性，提示该化合物为一生物碱，13C-NMR提供20个碳信号，DEPT谱区分3个亚甲基信号（CH2），1个氮取代甲基信号（N—CH3），3个甲氧基信号（CH3O），1个次甲基信号（CH），3个氢取代芳香碳信号和9个取代芳香环碳信号，1H-NMR低场区给出一对偶合的芳环质子信号和一个单峰芳环质子信号，结合1H-NMR，13C-NMR、DEPT可以确定化合物分子式为C20H23NO4，其1H-NMR，13C-NMR数据与文献中异紫堇碱数据完全一致（表5-37），通过X-Ray单晶衍射实验验证化合物5为异紫堇碱（图5-38、图5-39），故化合物5鉴定为异紫堇碱。

化合物6（图5-43）　白色柱状结晶，碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性，提示该化合物为一生物碱，13C-NMR提供20个碳信号，DEPT谱区分3个亚甲基信号（CH2），1个氮取代甲基信号（N—CH3），3个甲氧基信号（CH3O），1个次甲基信号（CH），3个氢取代芳香碳信号和9个取代芳香环碳信号，1H-NMR低场区给出一对偶合的芳环质子信号和一个单峰芳环质子信号，结合1H-NMR，13C-NMR、DEPT可以确定化合物分子式为C20H23NO4，其1H-NMR，13C-NMR谱图与化合物5极为相似，可见化合物3也为阿普菲类生物碱，其1H-NMR，13C-NMR数据与文献中紫堇碱数据完全一致（表5-38），故化合物6鉴定为紫堇碱。

化合物7：白色结晶，dragendorff试剂显橙红色显示该化合物可能为生物碱类化合物；由1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）、13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）和DEPT谱图可知，该化合物分子中含有21个碳、2个亚甲基、2个甲氧基。该化合物的1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）、13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）该化合物的实际测量值见表5-39，数据与参考文献基本一致，该化合物7确定为N-甲基莲叶桐文碱。

化合物8：白色粉末，dragendorff试剂显橙红色；化合物8与化合物9为一对应异构体，在1H-NMR谱中可以清晰地看到二者的比例关系为1∶2，两个化合物在C-14位存在顺反异构体，二者没有在TLC中得到分离，为一混合物，其HRESI-MS m/z 354.1174[M]+（计算值C20H20NO5为354.1336）；与原阿片碱的1H-NMR（CDCl3 400MHz）和13C-NMR（CDCl3 100MHz）比较及文献，将各个峰归属如下，δ：7.08（1H，s，H-1），6.83（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.89（2H，m，H-6），4.05（2H，d，J=17.6Hz，H-8），6.90（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.73（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.05（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16，—OCH2O—），2.92（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）：105.5（C-1），146.4（C-2），147.1（C-3），109.1（C-4），125.5（C-4a），22.9（C-5），52.5（C-6），54.2（C-8），62.4（C-8a），142.0（C-9），146.4（C-10），108.5（C-11），121.4（C-12），122.6（C-12a），38.5（C-13），92.4（C-14），127.4（C-14a），101.6（C-15，16），44.0（N—CH3）。化合物8确定为顺式普罗托品季铵盐。

化合物9：化合物9与化合物8为一对应异构体混合物；谱图上各个峰的归属：1H-NMR（CDCl3 400MHz），δ：7.33（1H，s，H-1），6.89（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.86（2H，m，H-6），4.54（2H，d，J=6.4Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.82（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.08（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16，—OCH2O—），3.32（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：106.2（C-1），147.0（C-2），148.1（C-3），108.1（C-4），123.2（C-4a），23.3（C-5），53.3（C-6），54.7（C-8），108.4（C-8a），143.5（C-9），145.6（C-10），108.2（C-11），121.9（C-12），122.2（C-12a），34.3（C-13），91.6（C-14），125.5（C-14a），101.8（C-15，16），42.1（N—CH3）。以上数据与文献一致，鉴定化合物9为反式普罗托品季铵盐。

化合物10（图5-44）：白色晶体，mp208～209℃，碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性，提示该化合物为一生物碱，熔点mp204～206℃。13C-NMR提供20个碳信号，DEPT提示高场区1个氮甲基信号（41.4），4个亚甲基信号，低场区有4个氧取代芳环碳信号和4个未取代芳环碳信号，以及4个碳取代芳环碳信号以及1个羰基碳信号，1H-NMR中芳环质子有1对偶合和2个单峰信号，由1H-NMR，13C-NMR以及DEPT谱可以确定化合物10的分子式为C20H19NO5，其NMR数据与文献中原阿片碱（普罗托品）的数据基本一致，故化合物10鉴定为原阿片碱（普罗托品）。

化合物11（图5-45）：无色柱晶，mp162～165℃，碘-碘化铋钾生物碱试剂反应阳性，提示该化合物为一生物碱；13C-NMR提供21个碳信号，DEPT提示高场区1个氮甲基信号（41.2），3个亚甲基信号，低场区有4个氧取代芳环碳信号和4个未取代芳环碳信号，以及4个碳取代芳环碳信号及1个羰基碳信号，1H-NMR中芳环质子有1对偶合和2个单峰信号，由1H-NMR，13C-NMR及DEPT谱可以确定化合物4的分子式为C21H23NO5；其NMR数据与文献完全一致（表5-40），故化合物11鉴定为别隐品碱。