第三节　药物的鉴别方法

药物的鉴别方法要求专属性强、重现性好、灵敏度高，以及操作简便、快速等。常用鉴别方法有化学鉴别法、光谱鉴别法、色谱鉴别法和生物学鉴别法等。

一、化学鉴别法

化学鉴别法是在供试品中加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。本法具有反应迅速、现象明显明确、实验成本低、应用广的特点，但专属性比仪器分析法差。

1.呈色反应鉴别法

呈色反应鉴别法是指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。

在鉴别试验中最为常用的反应类型如下。

①三氯化铁呈色反应：多用于鉴别含有酚羟基或水解后产生酚羟基的药物。

②异羟肟酸铁反应：多用于鉴别含有芳香酸及其酯类、酰胺类的药物。

③三酮呈色反应：多用于含有脂肪氨基的药物。

④重氮化-偶合显色反应：多用于芳伯氨基或能产生芳伯氨基的药物。

⑤氧化还原显色反应及其他颜色反应。

2.沉淀生成反应鉴别法

常用的此类反应如下。

（1）与重金属离子的沉淀反应　在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀。

（2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应　多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。

（3）其他　沉淀反应。

3.荧光反应鉴别法

常用的荧光发射形式有以下类型。

①药物本身可在可见光下发射荧光。

②药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光。

③药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光。

④药物和间苯二酚反应后发射出荧光及药物经其他反应后发射荧光。

4.气体生成反应鉴别法

①大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨气。

②化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。

③含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。

二、光谱鉴别法

1.紫外光谱鉴别法

紫外吸收光谱是物质分子在紫外可见光区（200～780nm）由于电子能级的跃迁而产生的光谱，称为紫外-可见吸收光谱。利用紫外吸收光谱进行分析鉴别的方法就称为紫外光谱法。不同结构的药物会显示不同的吸收光谱，可作为鉴别的依据。该法主要适用于具有苯环或共轭体系的有机药物分子。紫外光谱鉴别法具有操作简便、反应快速的特点。

常用的紫外光谱鉴别方法有：

①测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；

②规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸光度；

③规定吸收波长和吸收系数法；

④规定吸收波长和吸光度比值法；

⑤经化学处理后，测定其反应产物吸收光谱特性。

以上方法可以单独使用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。

【案例】　《中国药典》（2015年版）贝诺酯的鉴别：取本品适量，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释成每1ml中约含7.5μg的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在240nm的波长处有最大吸收，测定吸光度，按干燥品计算，吸收系数（）为730～760。

2.红外光谱鉴别法

红外吸收光谱（4000～400cm-1）是物质分子的振动、转动能级跃迁产生的吸收光谱。利用红外吸收光谱进行分析鉴别的方法就称为红外光谱法。该法主要用于组分单一、结构明确的原料药物，特别适合用其他方法不易区分的同类药物的鉴别。红外光谱在用于药物的鉴别时，主要比较供试品光谱与对照光谱的一致性，来判定两化合物是否为同一物质。该法具有专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的特点。

《中国药典》（2015年版）多采用标准图谱法，就是参照药典委员会编纂的《药品红外光谱集》按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。《美国药典》多采用对照品比较法，就是将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，对比供试品与对照品图谱中的最大吸收波数彼此是否一致。该法可消除不同仪器和操作条件造成的误差。

【案例】　《中国药典》（2015年版）规定头孢克洛的红外色谱法鉴别试验为：本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。如不一致，可分别取本品和对照品适量，加甲醇溶解，挥干溶剂后，取残留物照红外分光光度法（通则0402）测定，二者的红外光吸收图谱应一致。

三、色谱鉴别法

色谱鉴别法是利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（比移值或保留时间）进行鉴别试验。同一种药物在同样条件下的色谱行为是相同的，依此可以鉴别药物及其制剂的真伪。常用的色谱鉴别方法有薄层色谱鉴别法、高效液相色谱鉴别法、气相色谱鉴别法、纸色谱鉴别法，这里只介绍前两种方法。

1.薄层色谱鉴别法

在实际工作中，一般采用对照品比较法，即将供试品和对照品用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样、展开、显色，供试品所显主斑点的颜色、位置应与对照品的主斑点相同，斑点位置以比移值来表示。薄层色谱法是一种简便易行的方法，一般用于药品的鉴别或杂质检查。

【案例】　《中国药典》（2015年版）规定诺氟沙星的薄层色谱法鉴别试验为：取本品与诺氟沙星对照品适量，分别加三氯甲烷-甲醇（1:5:1）制成每1ml中含2.5mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液（15:10:3）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的位置与荧光应与对照品溶液主斑点的位置与荧光相同。

2.高效液相色谱鉴别法

是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱中进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。此法专属性较强，但操作费时，故一般在“检查”或“含量测定”项下已采用高效液相色谱法的情况下，才采用此法鉴别。

【案例】　《中国药典》（2015年版）规定头孢克洛的高效液相色谱法鉴别试验为：取本品适量，照含量测定项下方法试验，供试品的主峰保留时间应与头孢克洛对照品主峰的保留时间一致。

四、生物学鉴别法

系利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。