药用植物学实验指导(全国中医药行业高等教育“十四五”规划教材配套用书)
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二、后含物

【实验材料】

马铃薯(Solanum tuberosum L.)块茎、半夏〔Pinellia ternate(Thunb.)Breit.〕和浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)的粉末、桔梗〔Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.〕根、大丽菊(Dahlia pinnata Cav.)块根、蓖麻(Ricinus communis L.)种子、大黄(Rheum officinale Baill.)根及根茎粉末、曼陀罗(Datura stramonium L.)叶粉末、半夏〔Pinellia ternata(Thunb.)Breit.〕块茎粉末、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)根及根茎的粉末、黄柏(Phellodendron amurense Rupr.)树皮粉末、牛膝(Achyranthes bidentata Bl.)根粉末、地骨皮(Lycium chinensis Mill.)根皮粉末、射干〔Belamcanda chinensis(L.)DC.〕根状茎粉末、印度橡胶树(Ficus elastica Roxb.ex Hornem)叶或无花果(Ficus carica L.)叶、穿心莲〔Andrographis paniculata(Burm.F.Nees)〕叶。

【实验步骤】

1.淀粉粒

(1)取马铃薯块茎切成小块,用新鲜的创面将液汁涂于载玻片上,加甘油醋酸试液制成临时装片,先在低倍镜下观察淀粉粒,注意其形状。再换高倍镜观察,注意脐点和层纹,同时分辨单粒淀粉、复粒淀粉、半复粒淀粉。为了区别淀粉粒和白色质体,可用稀碘液来鉴别,淀粉粒遇稀碘液呈蓝紫色,而白色体不变色。

(2)取少量半夏粉末置于滴加1~2滴稀甘油的载玻片上,并用解剖针轻轻将粉末与稀甘油充分搅匀,然后加盖盖玻片制成粉末装片,置于镜下观察。

(3)按上述方法制成浙贝母粉末装片置显微镜下观察,与马铃薯淀粉粒进行比较,注意淀粉粒的大小、形状、层纹、脐点有何不同,找出各自淀粉粒的特征(图1-2、图1-3)。

图1-2 淀粉粒结构

图1-3 马铃薯淀粉粒类型

1.单粒淀粉 2.半复粒淀粉

2.菊糖

取用乙醇浸泡好的大丽菊块根或桔梗根,将其切成小块,然后在木质部以外的部分做纵向徒手切片,切片要薄,取一小块薄片置于载玻片上,再加95%乙醇一小滴,然后盖上盖玻片,迅速在显微镜下观察菊糖的形态结构,在薄壁细胞内,靠近细胞壁分布的一些扇形或圆球形晶体即为菊糖,并有放射状纹理。亦可在相邻细胞同时出现。

将上述制片加水1~2滴,并稍加热,注意观察菊糖有何变化?用上述方法再制作切片,直接滴加α-萘酚试剂一小滴,过1~2分钟后再滴加80%硫酸一滴,盖好盖玻片,立即置于显微镜下观察,可见菊糖一边溶解一边染上紫红色(图1-4)。

图1-4 大丽菊块根菊糖

3.糊粉粒(蛋白质粒)

取蓖麻种子,剥去种皮,做胚乳的徒手切片,切片不需很大,但要薄,取切好的一小片胚乳薄片置于载玻片上,首先用乙醚脱脂,具体操作如下:在载玻片上反复滴加乙醚数次,每次1~2滴,稍等片刻,略使载玻片倾斜将细胞内的脂类随乙醚流失,再加50%乙醇稀释。再加10%的碘甘油试液一滴制成临时装片,置显微镜下观察。先在低倍镜下进行观察,选择细胞内糊粉粒少的、分散的、清晰的1~2个胚乳细胞转换高倍镜下观察,可见细胞内的糊粉粒常由一个多边形的蛋白质晶体、一个磷酸盐组成的球晶体以及无定形的蛋白质基质所组成。经染色后糊粉粒呈暗黄色,基质染成黄色,球晶体不被染色。

4.草酸钙晶体

(1)簇晶 取大黄根及根茎粉末或曼陀罗叶粉末少许,置于滴加1~2滴水合氯醛试液的载玻片上。用右手的食指和拇指夹紧载玻片,在距酒精灯火苗上3~4cm做轻微的位置移动,慢慢加热进行透化,蒸至近干时再添加新的试剂,重复直至材料颜色变浅而透明时,停止处理,加稀甘油1滴,盖上盖玻片,拭净其周围的试剂,置显微镜下观察,可见到许多大型、形如星状的草酸钙簇晶。注意加热时不能用镊子夹载玻片,因为用食指和拇指才能夹紧载玻片,并能感觉载玻片的温度,调整加热程度。

(2)方晶 取黄柏粉末或甘草粉末少许,按上述方法制片,置显微镜下观察,在粉末中可见到一些方形、不规则方形及斜方形等形状的晶体。这些方晶常成行排列于纤维束旁边的薄壁细胞中,这种由一束纤维外侧包围着许多含有草酸钙方晶的薄壁细胞所组成的复合体称为晶鞘纤维。

(3)针晶 取半夏粉末少许,按上述方法透化后制片观察,在半夏块茎粉末中可见散在或成束的针状草酸钙晶体。也可见到类圆形黏液细胞中含有排列整齐的针晶束。

(4)砂晶 取地骨皮粉末少许,按上述方法制片,在粉末中可见到类圆形的薄壁细胞中充满了细小三角形或箭头状的草酸钙砂晶。在显微鉴别草酸钙晶体时,其中砂晶是比较难鉴别的一种。因砂晶存在于某些薄壁细胞中,将药材研成粉末后砂晶多分散于药材粉末之中,而且数量很少,故难以与药材粉末区别。观察时注意以下几点:①砂晶虽然很少,但大小非常均匀。②其形状为小的三角形颗粒,立体感较强。③在调节微调节器时砂晶常有忽明忽暗的感觉,或略比周围粉末光亮。若用地骨皮制成徒手切片,观察效果好于粉末制片。

(5)柱晶 取射干粉末少许,按上述方法制片,置显微镜下观察,可见到棱角分明的长柱形晶体,晶体呈透明状。

(6)取大黄根茎粉末的制片2片,分别滴加6%醋酸和20%硫酸试液,稍过片刻,置显微镜下观察结晶有什么变化(图1-5)。

图1-5 草酸钙晶体类型

1.簇晶(大黄)2.针晶(半夏)3.方晶(黄柏)4.柱晶(射干)5.砂晶(红景天)

5.碳酸钙晶体

(1)取印度橡胶树叶或无花果叶片,割取局部一小块,沿断面做徒手切片,将切下的薄片放置于盛水的培养皿中,然后挑选最薄的材料,置于载玻片上,制成临时水装片。置镜下观察,靠近叶面表皮细胞的大型细胞内有一个葡萄状的结晶体附着在细胞壁增生的棒状物上,悬挂在细胞腔中,形似钟乳体,即碳酸钙结晶,又称钟乳体。

(2)取穿心莲叶片,经水合氯醛透化后用稀甘油封片,置显微镜下观察,可见螺状的钟乳体。因穿心莲叶片略厚,一次透化难以达到看清的效果,故需反复几次进行透化才能达到理想的效果(图1-6)。

图1-6 穿心莲叶片钟乳体

(3)用已制好的印度橡胶树叶徒手切片2片,分别滴加6%醋酸和20%硫酸试液,观察其所发生的变化。