（六）激光扫描共聚焦显微技术

激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope，LSCM）是以激光束为光源，将光学显微镜技术、激光扫描技术和计算机图像处理技术结合在一起的设备。其主要装置包括激光器、扫描头、显微镜和计算机四大部分，用于研究和分析细胞在变化过程的结构，也可对活细胞离子含量变化进行定量检测等。

激光扫描共聚焦显微镜主要应用于以下几个方面。

1.免疫荧光定量定位测量　借助免疫荧光标记方法，激光扫描共聚焦显微镜不仅可对细胞的细胞器、DNA、RNA、酶和受体分子的含量、成分及分布进行定性和定量测定；还可测定细胞的膜电位、氧化-还原状态及配体结合等生化反应；与此同时，还能够对所获得的图像进行定量分析，提高结果的准确性。

2.细胞内离子测定　使用荧光探针，可对神经细胞的Ca2+、H+及其他各种细胞内离子进行定量和动态分析；使用双荧光探针还可对Ca2+和H+等同时测定。

3.细胞间通讯研究　可从形态学上观察细胞间连接的变化、连接蛋白和黏附因子；测量细胞间隙连接介导分子转移；测定某些因子对神经元间通讯的影响等。

4.细胞膜流动性测定　利用专用软件可对细胞膜的流动性进行定量和定性分析，对膜磷脂和脂肪酸组成、药物效应和作用点、温度反应和物种比较等研究都有重要意义。

5.图像重组　通过激光扫描共聚焦显微镜的共聚焦系统，可获得生物样品高反差、高分辨率和高灵敏的二维图像，再利用其模拟荧光处理软件，可将系列光学切片的数据合成三维图像，三维重组图像可使神经细胞、细胞器的形态学结构更生动逼真。