第四章
动物疫病的监测与诊断
第一节 动物疫病的监测
动物疫病监测是在诊断的基础上，对动物疫病进行长期的统计、分析和对比，研究影响疫病发生、传播、流行的因素，明确流行规律，指导疫病风险分析。动物疫病监测对预防动物疫病的流行具有重要意义，特别是危害性大的人畜共患传染病，监测动物感染情况极为重要，因为动物发病数量不断增多是病原微生物正在活动的信号，预示着疫病将有可能在动物或人间传播。
一、监测系统
动物疫病监测系统是动物防疫体系的基础。农业农村部通过建立和完善国家参考实验室、区域性专业实验室和省级诊断试验室三级检测体系，并在全国设立地县级动物疫情测报站、边境动物疫情监测站和野生动物疫源疫病监测站，严格执行监测方案，为防控动物疫病提供科学的预测预警。中国动物疫病预防控制中心和各省动物疫病预防控制中心根据各地动物疫病预防控制机构提供的监测信息，按照动物疫情的发生、发展规律和特点，对重大动物疫情进行风险分析，根据监测结果进行汇总、分析后实施疫情预警，并及时向有关部门和各地通报。
二、监测目的
为及时掌握动物疫病流行规律和疫情动态，消除疫情隐患，增强重大动物疫情预警预报能力，全面掌握和分析高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病等主要动物疫病疫源分布和疫病流行规律，及时发现疫情隐患，指导各地开展重大动物疫病风险评估，发布预警预报，有针对性地开展动物疫病预防控制工作。
三、监测方法
各种动物疫病的监测必须按国家标准或行业监测规程规定的操作技术进行。动物疫病监测主要用血清学方法和病原学方法。常用的血清学监测方法有琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）、血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验、变态反应试验、补体结合反应、ELISA等；病原学监测方法主要有病毒（细菌）分离鉴定、聚合酶链式反应（PCR）等。
四、监测结果处置
各级疫情监测部门应按农业农村部要求上报监测结果。根据疫情监测情况，及时发布相关信息，组织风险评估、预警预报，并采取相关措施。监测中发现病原学阳性的，应按规定处理。对高致病性禽流感、口蹄疫等重大动物疫病病原学阳性畜禽及同群畜禽进行扑杀的，应按重大动物疫情处置的有关规定给予补偿。监测中发现免疫抗体不合格的，应向兽医主管部门及时报告，研究落实强化免疫措施。
第二节 动物疫病的诊断
动物疫病的及时而正确的诊断是预防和扑灭动物疫病的重要环节，它直接决定能否有效地组织落实防治措施。动物疫病的诊断应在临床诊断、流行病学诊断和病理学诊断的基础上，通过实验室诊断，综合分析，才能得出正确的结论。
一、临床诊断
这是最基本的诊断方法。它是利用人的感官或借助最简单的器械如体温计、听诊器等直接对动物进行检查，有时也包括血、粪、尿的常规检测。对于某些具有特征临诊病状的典型病例不难作出诊断，如破伤风、猪丹毒等。但临床诊断具有一定的局限性，应注意对整个发病动物群体所表现的综合病状加以分析判断，切勿轻易下结论，以免误诊。
二、流行病学诊断
流行病学诊断是在流行病学调查的基础上进行的。流行病学诊断往往与临诊诊断联系在一起，某些传染病的临诊病状相似，但其流行特点和规律却不一致。如口蹄疫、水疱性口炎、水疱病和水疱性疹等病，临诊病状几乎完全一样，但在流行病学方面却不难区分。
三、病理学诊断
由于传染病而死亡的动物，一般都会有一定的病理变化，可作为诊断的重要依据之一，如猪瘟、鸡新城疫、牛肺疫等，都有特征性的病理变化，常常有很大的诊断价值。最急性死亡和早期屠宰的病例，有时特征性病变尚未出现，所以在病理剖检时尽可能增加一些剖检数量，并选择病状较典型的病例。有些疫病除眼观病理变化外，还要进一步作病理组织学检查。
四、实验室诊断
实验室诊断可为动物疫病的最后确诊提供可靠的科学依据。包括病原学检测、血清学检测和分子生物学检测等诊断方法。
1．病原学检测
几乎所有的动物疫病都有明确的病原体，病原体的证实和分离是确诊的可靠手段。应根据病原体入侵的途径和发展规律适时正确地采集标本，便于诊断确定。寄生虫病可采取剖检、虫卵镜检、涂片检查等技术；细菌病可采取染色镜检、分离纯化、分型判定、实验动物检测等技术；病毒病可采取病毒分离、抗体中和、PCR等技术。
2．血清学检测
就是利用抗原和特异性抗体的反应进行诊断，主要有三大类：
（1）免疫反应 就是利用完全抗原和抗体的可见反应进行诊断，如凝集反应、沉淀反应、琼脂扩散、中和实验等。
（2）免疫标记 对于抗原和抗体没有肉眼可见反应，用红细胞、酶、荧光等进行显示，如免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫分析等。
（3）变态反应 主要是利用动物体T淋巴细胞被抗原致敏，使用抗原物质进行过敏检测，例如结核菌素点眼、皮内变态反应等。
3．分子生物学检测
包括PCR、RT-PCR、核酸探针、单克隆抗体技术、免疫印迹和生物芯片等。
第三节 病料的采集
病料采集是进行动物疫病监测、诊断的一项重要基础工作。熟练掌握样品采集操作方法对于快速、及时诊断和处理动物疫病具有重要意义。主要采集畜禽的血样、分泌物和组织样品。
一、采集畜禽血样
（一）耳静脉采血
1．适用对象
猪、羊、兔等采集比较少的血量。
2．操作步骤
将猪、兔站立或横卧保定，或用保定器具保定；耳静脉局部按常规消毒处理；用手指捏压耳根部静脉血管处，使静脉充盈、怒张（或用酒精棉反复局部涂擦以引起其充血）；术者用左手把持耳朵，将其托平并使采血部位稍高；右手持连接针头的采血器，沿静脉管使针头与皮肤呈30°~45°角，刺入皮肤及血管内，轻轻回抽针芯，如有回血即证明已刺入血管，再将针管放平并沿血管稍向前伸入，抽取血液。
（二）颈静脉采血
1．适用对象
马、牛、羊等采集比较多的血量。
2．操作步骤
保定好动物，使其头部稍前伸并稍偏向对侧，对颈静脉局部进行剪毛、消毒；看清颈静脉后，采血者用左手拇指（或食指与中指）在采血部位稍下方（近心端）压迫静脉血管，使之充盈、怒张；右手持采血针头，沿颈静脉沟与皮肤呈45°角，迅速刺入皮肤及血管内，如见回血，即证明已刺入；使针头后端靠近皮肤，以减小其间的角度，近似平行地将针头再伸入血管内1~2厘米；放开压迫脉管的左手，收集血液。采完后，以干棉球压迫局部并拔出针头，再以5%碘酊进行局部消毒。
3．注意事项
（1）采血完毕，做好止血工作，即用酒精棉球压迫采血部位止血，防止血流过多。酒精棉球压迫前要挤净酒精，防止酒精刺激引起流血过多。
（2）牛、水牛的皮肤较厚，颈静脉采血刺入时应用力并瞬时刺入，见有血液流出后，将针头送入采血管中，即可流出血液。
（三）前腔静脉采血
1．适用对象
多用于猪，适用于大量采血。
2．操作步骤
将猪仰卧保定，把前肢向后方拉直。选取胸骨端与耳基部的连线上胸骨端旁开2cm的凹陷处，消毒。用装有20号针头的注射器刺入消毒部位，针刺方向为向后内方与地面呈60°角刺入2~3cm，当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入管内，采血完毕，局部消毒。
（四）心脏采血
1．适用对象
家兔、禽类等个体比较小的动物。
2．兔心脏采血操作步骤
先确定心脏的生理部位，家兔的心脏部位约在胸前由下向上数第三与第四肋骨间，选择用手触摸心脏搏动最强的部位，去毛消毒。将稍微后拉栓塞的注射器针头由剑状软骨左侧呈30°~45°刺入心脏，当家兔略有颤动时，表明针头已穿入心脏，然后轻轻地抽取，如有回血，表明已插入心腔内，即可抽血；如无回血，可将针头退回一些，重新插入心腔内，若有回血，则顺心脏压力缓慢抽取所需血量。
3．禽类心脏采血操作步骤
（1）雏鸡心脏采血 左手抓鸡，右手手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。
（2）成年禽类心脏采血 成年禽类采血可取侧卧或仰卧保定。
①侧卧保定采血：助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒，垂直或稍向前方刺入2~3厘米，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。
②仰卧保定采血 胸骨朝上，用手指压离嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏。
（五）翅静脉采血
1．适用对象
禽类在采血量少时采用此法。
2．操作步骤
将禽侧卧保定，展开翅膀，露出腋窝部，拔掉羽毛，在翅下静脉处消毒。拇指压迫近心端，待血管怒张后，用装有细针头的注射器，平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。
（六）趾静脉采血
1．适用对象
鸭、鹅在采血量少时采用此法。
2．操作步骤
将鸭、鹅仰卧保定，两手将鸭子的两只脚固定，胳膊夹住，尽量使趾部位不要动。采血者先酒精对趾部皮肤进行消毒，可以观察到明显的血管，同时按压血管上部，利于血管充盈暴露，然后用2ml的一次性注射器从血管一侧插针，慢慢采血。
二、采集畜禽分泌物
（一）采集家禽喉拭子和泄殖腔拭子
取无菌棉签，插入鸡喉头内或泄殖腔转动几圈，取出，插入离心管内，剪去露出部分，盖紧瓶盖，作好标记。
（二）采集猪鼻腔拭子、咽拭子
用灭菌的棉拭子在鼻腔或咽喉转动至少几圈，采集鼻腔、咽喉的分泌物。蘸取分泌物后，立即将拭子浸入保存液中，剪去露出部分，盖紧离心管盖，作好标记，密封低温保存。
（三）采集肛拭子
采集方法同鼻腔拭子、咽拭子采集方法。
（四）采集粪便样品
1．用于病毒检测的粪便采集
①少量采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔黏膜上蘸取粪便，并立即投入灭菌的试管内密封，或在试管内加入少量磷酸缓冲液后密封。
②采集较多量的粪便时，可将动物肛门周围消毒后，用器械或用带上胶手套的手伸入直肠内取粪便，也可用压舌板插入直肠，轻轻用力下压，刺激排粪，收集粪便。所收集的粪便装入灭菌的容器内，经密封并贴上标签。
③样品采集后立即冷藏或冷冻保存。
2．用于细菌检测的粪便采集
采样方法与供病毒检测的方法相同。但采集的样品最好是在动物使用抗菌药物之前的，从直肠或泄殖腔内采集新鲜粪便。粪便样品较少时，可投入生理盐水中；较多量的粪便则可装入灭菌容器内，贴上标签后冷藏保存。
3．用于寄生虫检测的粪便采集
采样方法与供病毒检测的方法相同。应选新鲜的粪便或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态。一般寄生虫检测所用粪便量较多，需采取适量新鲜粪便，并应从粪便的内外各层采取，以冷藏不冻结状态保存。
（五）采集脓汁
做病原菌检测的脓汁，应在未用药物治疗前采取。采集已破口脓灶脓汁，宜用灭菌棉拭子蘸取，置入灭菌离心管中，剪去露出部分，盖紧离心管盖，作好标记，密封低温保存。未破口脓灶，用灭菌注射器抽取脓汁，密封低温保存。
（六）采集乳汁
乳房先用消毒药水洗净（取乳者的手亦应事先消毒），并把乳房附近的毛刷湿，最初所挤的前3~4把乳汁弃去，然后再采集10ml左右乳汁于灭菌试管中。
（七）注意事项
①用作细菌检查的样品内不要混入消毒液，以免产生杀菌作用而影响结果。
②做细菌检查的不能冷冻，最好冷藏，立刻送实验室分离细菌。
③咽、鼻、泄殖腔拭子采集样品时，要注意人员的安全，动物保定要牢靠。
三、采集畜禽组织样品
1．实质脏器的采集
应在剖开胸腹腔后立即采取，如果剖开后暴露时间太长有被污染的可能时，则应在采集部位用酒精棉或烧红的铁箅烧烙后于烧烙部中间采取6~10cm2的脏器块，分别置于灭菌容器或塑料袋内。
2．脑与脊髓的采集
按病理解剖开颅术要求大开头盖骨。采集脑、脊髓放灭菌容器或保存液中保存。
3．病理组织学检测的采样
当怀疑是某种传染病时，应注意选择典型病变部位连同邻近的正常组织一并采集。取材用的刀剪要锋利，切面要求整齐，盛放的容器要大些，以免因挤压而造成脏器变形。
第四节 病料的保存与运输
一、样品的包装
采集的样品应仔细分别包装，在样品袋、塑料离心管、西林瓶或平皿外面贴上标签，标签注明样品名、样品编号、采样日期等。再将各个样品放到塑料包装袋、塑料盒或铝盒等密封的容器内，容器的表面必须用消毒剂擦拭，贴上标签，注明样品来源、种类、保存方法、采集时间等，并标注放置方向，切勿倒置。
二、样品的保存和运输
（1）样品应置于保温容器中运输，保温容器应密封，防止渗漏。一般使用保温箱或保温瓶，保温容器外贴封条，封条有贴封人（单位）签字（盖章），并注明贴封日期。
（2）样品应在特定的温度下运输，拭子样品和组织样品应作暂时的冷藏或冷冻处理，然后立即运送实验室。做病理检查的病料应立即将采取的脏器浸入10%福尔马林中固定。
①若能在4h内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。
②如果超过4h，应作冷冻处理，先将样品置于-20℃冻结，然后再在保温箱内加冰袋运输，经冻结的样品必须在24h内送到。
③若24h不能送到实验室，则运输过程中环境温度应保持在-20℃以下。
（3）血清样品要单独存放。若24h内运达实验室，在保温箱内加冰袋冷藏运输；若超过24h，要先冷冻后，在保温箱内加大量冰袋运输，途中不能超过48h。
（4）各种样品到达实验室后，若暂时不进行处理，则应冷冻（以-70℃或以下为宜）保存，不应反复冻融。