第五节　肾素-血管紧张素-醛固酮系统的检验

一、RA法测定血浆肾素活性

1.原理 由于肾素在体内作用于底物———血管紧张素原并产生血管紧张素Ⅰ（AngⅠ），因此测定血浆肾素活性（renin activity，RA）实际上是测AngⅠ的产生速率。即双份血浆，一份直接测定其AngⅠ浓度，为对照管；另一份在37℃温育一定时间后，再测定其AngⅠ浓度，为测定管。根据测定管和对照管的AngⅠ浓度，计算出AngⅠ的产生速率，即为RA。AngⅠ含量测定采用放射免疫技术，其原理与普通放射免疫分析原理一致。

2.主要试剂 商品化试剂盒一般包括抗AngⅠ抗体、¹²⁵ I标记AngⅠ、AngⅠ标准品、缓冲液、分离剂等。有些试剂盒还包括特殊的抗凝剂。

3.操作步骤 采用均相竞争法直接测定血浆中的AngⅠ，严格按照试剂盒说明书操作，注意放射性污染。各管经γ计数后，通过绘制标准曲线，求出各管AngⅠ的结果。根据对应测定管和对照管的AngⅠ浓度差值，计算RA，一般采用37℃孵育1h所产生的AngⅠ来表示RA。公式如下。

RA=（测定管AngⅠ-对照管AngⅠ）/孵育时间

4.参考范围 ①普通饮食（卧位）：0.05～0.79ng/（mL•h）；②低钠饮食（卧位）：0.00～5.86ng/（mL•h）。

5.评价

（1）肾素活性是以AngⅠ产生速率来表示的。标本采集时采用加酶抑制剂来阻断转换酶的活性，从而达到准确测定的目的。标本采集的抗凝剂和酶抑制剂包括：EDTA、8-羟基喹啉和二巯丙醇，详见试剂盒说明书。低温离心分离血浆后，可于-20℃保存2个月。

（2）β受体阻滞药、血管扩张药、利尿药、甾体激素、甘草等均影响体内肾素水平，测定RA一般要在停药2周后；若用利血平等代谢缓慢的药物，则应在停药2～3周后。不宜停药的患者可改服胍乙啶等降压药。

（3）肾素分泌呈周期性变化，有较多的影响因素：高钠饮食时分泌减少，低钠饮食时分泌增多；卧位时分泌下降，立位时分泌升高；同一体位时早晨2～8时为分泌高峰，中午至下午6时为分泌低谷；肾素的分泌随年龄的增加而减少；肾素的分泌还随女性的月经周期而变化，卵泡期最少，黄体期最多。

二、RA法测定血管紧张素

1.原理 RA法测定血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）同放射免疫分析基本原理。

2.主要试剂 商品化试剂盒一般包括抗AngⅡ抗体、¹²⁵ I标记AngⅡ、AngⅡ标准品、缓冲液、分离剂等。有些试剂盒还包括特殊的抗凝剂。

3.操作 严格按照试剂盒说明书操作，注意放射性污染。

4.参考范围 21.5～50.1pg/mL。

5.评价 本法直接测定血浆中AngⅡ含量，采用加酶抑制剂来阻断血管紧张素酶的活性，以达到准确测定的目的。其余评价同RIA法测定血浆肾素活性的评价。

三、RA法测定醛固酮

1.原理 RIA法测定醛固酮（aldosterone，Ald）同放射免疫分析基本原理。

2.主要试剂 商品化试剂盒一般包括抗Ald抗体、¹²⁵ I标记Ald、Ald系列标准品、缓冲液、阻断剂、分离剂等。

3.操作步骤 严格按照试剂盒说明书操作，注意放射性污染。

4.参考范围 ①普通饮食（卧位）：59.5～173.9pg/mL；②低钠饮食（卧位）：121.7～369.6pg/mL。

5.评价

（1）采用肝素抗凝血浆测定，每1mL标本中加肝素注射液（12500U）10μL。应避免溶血，严重溶血可使结果升高2倍。

（2）实验中采用二抗-PEG分离，最好使用圆底试管，沉淀更容易集中。

（3）血浆钾、钠离子水平的变化对于血浆Ald水平影响很大，在钾、钠离子相对稳定的状态下测定Ald水平才有意义。