实验四 种子粗脂肪提取和定量测定——索氏提取法
实验类型 综合性
教学时数 9
一、实验目的
（1）学习索氏抽提法测定脂肪的原理与方法。
（2）掌握索氏抽提法基本操作要点及影响因素。
二、实验原理
利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂（本实验用石油醚，沸程为30～60℃）对样品中的脂类物质进行提取。因提取的物质是脂类物质的混合物，故称其为粗脂肪。
索氏提取器（图2-1）是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的，提取管两侧分别有虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。提取瓶内加入石油醚。加热提取瓶，石油醚汽化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热汽化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。
图2-1 索氏提取器
三、实验仪器与试剂
1.材料
花生油或猪油。
2.仪器
索氏提取器、电热恒温鼓风干燥箱、干燥器、恒温水浴箱、滤纸筒。
3.试剂
无水乙醚（不含过氧化物）或石油醚（沸程30～60℃）。
四、实验内容
1.样品处理
（1）固体样品 准确称取均匀样品2～5g（精确至0.01mg），装入滤纸筒内。
（2）液体或半固体 准确称取均匀样品5～10g（精确至0.01mg），置于蒸发皿中。加入海砂约20g，搅匀后于沸水浴上蒸干，然后在95～105℃下干燥。研细后全部转入滤纸筒内，用蘸有乙醚的脱脂棉擦净所用器皿，并将棉花也放入滤纸筒内。
2.索氏提取器的清洗
将索氏提取器各部位充分洗涤并用蒸馏水清洗后烘干。脂肪烧瓶在103℃± 2℃的烘箱内干燥至恒重（前后两次称量差不超过2mg）。
3.样品测定
（1）将滤纸筒放入索氏提取器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的脂肪烧瓶，由抽提器冷凝管上端加入乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3处，通入冷凝水，将底瓶浸没在水浴中加热，用一小团脱脂棉轻轻塞入冷凝管上口。
（2）抽提温度的控制 水浴温度应控制在使提取液在每6～8min回流一次为宜。
（3）抽提时间的控制 抽提时间视试样中粗脂肪含量而定，一般样品提取6～12h，坚果样品提取约16h。提取结束时，用毛玻璃板接取一滴提取液，如无油斑则表明提取完毕。
（4）提取完毕 取下脂肪烧瓶，回收乙醚或石油醚。待烧瓶内乙醚仅剩下1～2mL时，在水浴上赶尽残留的溶剂，于95～105℃下干燥2h后，置于干燥器中冷却至室温，称量。继续干燥30min后冷却称量，反复干燥至恒重（前后两次称量差不超过2mg）。
五、实验结果与计算
1.数据记录
2.计算公式
式中 X——样品中粗脂肪的质量分数，%；
m——样品的质量，g；
m0——脂肪烧瓶的质量，g；
m1——脂肪和脂肪烧瓶的质量，g。
六、注意事项
（1）抽提剂乙醚是易燃、易爆物质，应注意通风并且不能有火源。
（2）样品滤纸的高度不能超过虹吸管，否则上部脂肪不能提尽而造成误差。
（3）样品和醚浸出物在烘箱中干燥时，时间不能过长，以防止极不饱和的脂肪酸受热氧化而增加质量。
（4）脂肪烧瓶在烘箱中干燥时，瓶口侧放，以利空气流通。而且先不要关上烘箱门，与90℃以下鼓风干燥10～20min，驱尽残余溶剂后再将烘箱门关紧，升至所需温度。
（5）乙醚若放置时间过长，会产生过氧化物。过氧化物不稳定，当蒸馏或干燥时会发生爆炸，故使用前应严格检查，并除去过氧化物。
①检查方法：取5mL乙醚于试管中，加KI（100g/L）溶液1mL，充分振摇1min。静置分层。若有过氧化物则放出游离碘，水层是黄色（或加4滴5g/L淀粉指示剂显蓝色），则该乙醚需处理后使用。
②去除过氧化物的方法：将乙醚倒入蒸馏瓶中加一段无锈铁丝或铝丝，收集重蒸馏乙醚。
（6）反复加热可能会因脂类氧化而增重，质量增加时，以增重前的质量为恒重。
七、思考题
（1）简述索氏抽提器的提取原理及应用范围？
（2）潮湿的样品可否采用乙醚直接提取？为什么？
（3）使用乙醚作脂肪提取溶剂时，应注意的事项有哪些？为什么？