实验四　不染色标本的观察

细菌鞭毛与其动力有关，有无鞭毛，则细菌的运动方式不同。依其运动特点可间接判定细菌有无鞭毛，也是鉴定细菌的方法之一。应用不染色标本可直接观察活细菌的形态和运动，且能避免由于某些染色操作而引起细菌变形，常用的不染色标本的制备方法有悬滴法和压滴法。

证明细菌有无鞭毛，除显微镜直接观察其运动特点外，还可以通过鞭毛染色法直接观察有无鞭毛及其特点，也可以通过半固体穿刺培养法间接证明。

【实验材料】

枯草芽孢杆菌6～12小时肉汤培养物、葡萄球菌6～12小时肉汤培养物、凡士林、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、酒精灯等。

【实验方法】

1. 悬滴法：取干净的凹玻片和盖玻片各一张，涂少许凡士林于凹玻片窝的周围；取一接种环枯草芽孢杆菌6～12小时肉汤培养物滴于盖玻片中央，将盖玻片迅速翻转，覆盖于凹玻片窝上（图1-4）。轻压盖玻片，使其固定并密封，防止菌液变干，便于长时间观察。同法再以葡萄球菌6～12小时肉汤培养物做一悬滴片。

图1-4　悬滴法示意图

镜检方法：将集光器稍降下，使视野内光线变暗。用低倍镜找出悬滴的边缘，然后换用高倍镜或油镜观察滴内细菌的形态和运动。枯草芽孢杆菌有鞭毛能运动。它们可向不同方向运动，速度较快，相互间的位移很大。葡萄球菌没有鞭毛不能运动，但由于受水分子的撞击而呈分子运动（布朗运动），只在一定范围内往复颤动，相互间位移不大。按细菌运动性的不同，可以分析细菌有无鞭毛，这是鉴别菌种的要点之一。

2. 压滴法：分别取枯草芽孢杆菌和葡萄球菌6～12小时肉汤培养物，放于载玻片中央。小心地把盖玻片放于液滴之上，勿使中间产生气泡，中间液层越薄越好。镜检方法与悬滴法相同。本法较悬滴法简单，但标本容易干涸，不能长时间观察（注意：勿将菌液压溢到玻片边缘之外）。