实验六 基础培养基的制备
培养基是根据细菌生长繁殖的需要由人工配制的营养基质，培养基的基本成分有蛋白胨、氨基酸、糖类、盐和水分。除含有营养成分外，还要调节到适当的酸碱度（pH7.4～7.6），经灭菌后使用。常用的培养基有基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和厌氧培养基等。能使多数病原菌生长繁殖的培养基称为基础培养基。培养基按物理性状的不同又可分为液体、半固体和固体培养基三种。
培养基的主要作用是：①分离和繁殖细菌；②保存菌种；③鉴定细菌；④生产菌苗、抗生素；⑤细菌生理学的研究。
一、肉汤培养基的制备
肉汤培养基是常用的液体培养基，也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。
【实验材料】
鲜牛肉（去脂肪和肌腱）、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、10%碳酸氢钠、试管、三角烧瓶、蒸馏水等。
【实验方法】
1. 将新鲜牛肉500g切碎或搅碎，加水1000ml，放4℃冰箱或冷处浸泡过夜，然后煮沸30分钟，放凉，使残余的脂肪凝固，再用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。此溶液称为肉水或肉浸液。
2. 1000ml肉水中加入蛋白胨10g、氯化钠5g，加热溶解，放凉。
3. 用精密pH试纸测酸碱度，用10%碳酸氢钠校正pH为7.2左右。过碱时，可用10%醋酸校正之。
4. 酸碱度调整后，煮沸3～5分钟，补足因蒸发失去的水量，待冷后用滤纸过滤，使之澄清透明。并重新测定酸碱度一次，若变动较大，应再次矫正。
5. 分装于试管中或三角烧瓶中，103.4kPa（121℃）高压蒸汽灭菌20～30分钟。
若用市售的牛肉膏代替新鲜肉水时，可将牛肉膏溶成0.3%～0.5%的水溶液，再根据上述方法制成培养基。
二、普通琼脂培养基的制备
琼脂是从海藻中提取的一种多糖，俗称洋粉，具有100℃溶化，40℃凝固的特性。细菌不能分解琼脂，故无营养作用，仅是固体培养基的赋形剂。
普通琼脂培养基是常用的固体培养基，包括普通琼脂平板和普通琼脂斜面两种，前者用于分离纯种细菌，后者用于增殖纯种细菌或保存菌种。
普通琼脂培养基也可用市售的营养琼脂粉（含有普通琼脂培养基的各种成分并已调好pH）制备，用法见产品说明书。
【实验材料】
肉汤200ml、蛋白胨2g、氯化钠1g、琼脂5g、无菌平皿、灭菌试管、三角烧瓶等。
【实验方法】
1. 按实验材料的数量把肉汤、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。
2. 趁热用pH试纸测酸碱度，用10%碳酸氢钠校正pH为7.2左右。
3. 103.4kPa高压蒸汽灭菌20～30分钟。
4. 趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml（直径70mm），凝固后即成普通琼脂平板培养基；若趁热将培养基倒入灭菌试管内，再将试管斜放在试验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培养基（图1-7）。
图1-7 普通琼脂斜面培养基示意图
三、血液琼脂培养基的制备
有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培养基上生长不良，可用血液琼脂培养基进行培养。
【实验材料】
普通琼脂培养基200ml，血液（无菌脱纤维羊血或兔血）10～20ml。
【实验方法】
1. 加热溶化普通琼脂培养基。
2. 待冷至50℃左右时，加入无菌的脱纤维血液，混匀（注意勿使产生泡沫）。
3. 分别注入灭菌试管或平皿中制成血斜面和血平板培养基。
四、半固体培养基的制备
于肉膏汤或肉汤中加入0.3%～0.5%琼脂，加热溶化后，分装于试管中，经103.4kPa20分钟高压灭菌后，直立放置，冷却后即成半固体培养基。置37℃温箱中培养24小时无菌生长即可使用。常用于观察细菌动力和保存菌种。
【思考题】
1. 制备培养基的一般程序是什么？
2. 肉汤培养基、肉汤固体培养基和肉汤半固体培养基的配方成分有何区别？这三种培养基各有何用途？