全国临床检验操作规程(第4版)
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第五节 血清转铁蛋白测定

转铁蛋白( transferrin,TRF)为主要由肝细胞合成的,分子量约79.6kD的单链糖蛋白,半衰期约7天,pI为5.5~5.9,CAM电泳位置在β区带。TRF能可逆地结合铁、铜、锌、钴等多价阳离子。血浆TRF的主要生理功能是转运铁离子。从小肠进入血液的Fe 2 +必须被铜蓝蛋白氧化为Fe 3 +后才能与TRF结合,每分子TRF可结合2个Fe 3 +。TRF-Fe 3 +复合物与多种细胞,特别是骨髓造血细胞表面的TRF受体结合后,被摄入细胞解离出Fe 3 +,供合成血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素以及铁蛋白等,而TRF本身结构不变。血清TRF主要用免疫比浊法测定。

【原理】

人TRF为完全抗原,可制备其多或单克隆抗体。将抗人TRF抗体加入样本血清中,可通过抗原-抗体反应与血清中TRF特异性结合,形成免疫复合物微粒,导致浊度增加。在一定的条件下,如合适的抗原、抗体浓度,一定的免疫复合物微粒径/入射光波长比值等,浊度的增加与免疫复合物微粒数即TRF数相关,得以定量样本中TRF浓度。免疫浊度法对浊度改变的检测包括散射浊度法和透射浊度法2类方法(参阅本章第二节血清白蛋白测定中的免疫比浊法)。因透射浊度法在自动生化分析仪上即可完成,较多使用。

【试剂】

选用有正式批文、量值可溯源至人血清蛋白参考物CRM 470的质量可靠产品。下面以TRF透射浊度法某试剂盒为例。

1. pH

7.2磷酸缓冲液 ( 55mmol/L )  含25mmol/L NaCl、5%聚乙二醇( PEG)及防腐剂。

2.抗人转铁蛋白抗体工作液

含已调节到标定滴度的抗体、100mmol/L NaCl及防腐剂。

3.样本稀释液

pH 7.0的50mmol/L磷酸盐缓冲液,含150mmol/L NaCl和防腐剂。

【操作】

不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。

【结果计算】

根据待测样本浊度,以系列浓度TRF定标品绘制的曲线及拟合的方程式,自动计算出样本中TRF浓度。

【参考区间】

成人血清TRF浓度(透射浊度法) : 28.6~51.9μmol/L ( 2.3~4.1g/L),2种单位间换算公式为μmol/L×0.0796 = g/L。

【注意事项】 1.方法学特点

本法的人血清TRF最低检测限为1.26μmol/L ( 0.1g/L),线性范围为1.26~65.5μmol/L ( 0.1~5.2g/L),批内及批间CV均≤3.0%。黄疸、溶血及类风湿因子<1200IU/ml标本对本法无显著干扰,但脂浊及高甘油三酯血清有负干扰。

2.影响因素

有关透射浊度法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。

3.参考区间应用

以其他定量免疫学方法,包括散射免疫浊度法测定的结果与本法存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。

【临床意义】 1.贫血的鉴别诊断

缺铁性(低血色素性)贫血时,TRF代偿性合成增加,但铁饱和度(参阅本篇第三章第九节血清铁和总铁结合力测定)远低于30%;再生障碍性贫血时,TRF正常或低下,而铁饱和度增高。

2.负性急性时相反应蛋白

在炎症、肿瘤等急性时相反应时,与前清蛋白等同时下降。

3.判断营养状态及肝功能

在营养不良及慢性肝脏疾病时下降;肾病综合征时因TRF大量从尿丢失,血清水平下降。