抗体筛查试验的原则是让受检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞反应，以发现在37℃有反应的抗体。试验中使用的方法有盐水法、抗人球蛋白试验、白蛋白介质法、低离子强度溶液( LISS)法、聚凝胺( polybrene)法、凝胶法等。

红细胞血型抗体筛查适用于下列情况: ABO血型鉴定发现受检者血清中有不规则抗体时;供血者血清抗体筛检;输血前受血者血清抗体筛查;输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时;孕妇血清的抗体检查;新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查;直接抗球蛋白试验阳性红细胞放散液中抗体的检查。

当血清(或血浆)中的血型抗体是IgM免疫球蛋白时，具有相应抗原的红细胞在盐水介质中就可以直接被IgM性质的抗体凝集。

1.血清和血浆标本均可用于抗体筛查和鉴定。极少数情况下，需通过激活补体才能证实的抗体，才需使用血清标本。本节下文和第六节中除特指外，血清标本即血清或血浆标本。

2.血清标本的采取时间应注意。为了检出由于近期红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。

3.为了防止血样溶血对血清中抗体检测的影响，有必要把血清从凝块中分离，贮存在另一个单独的试管内，并适当标记、密封或用塞子塞紧。

4.红细胞放散液也可以作抗体筛查及鉴定。

5.如果以冷冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混合。如果一个样本要使用多次，应把它分成数小份后冷冻。反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。

6.每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、诊断、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疸等。

7.5～10ml全血分离得到的血清可鉴定单一特异性的抗体，如包含较多抗体，可能需要更多的全血。

1.抗体筛选细胞有多种商业化的试剂可供选择，以2个或3个抗原互补的单一供者红细胞为1套，单一人份红细胞的敏感性较混合红细胞更好。

2.针对于中国人群，一套筛选细胞至少有以下抗原通常被认为是合适的: D，C，E，c，e，M，N，S，s，P1，Lea，Leb，K，k，Fya，Fyb，Jka，Jkb 和Mur。

3.某些抗体与抗原反应时存在剂量效应，即抗体与抗原纯合的红细胞比与抗原杂合的红细胞反应要强，如Rh、MNS、Duffy和Kidd系统中的抗体。如果某种抗体只能与相应抗原的纯合子细胞反应，而筛选细胞上这种特定抗原是杂合子时，则该抗体有可能被漏检。合适的纯合子表型的供血者是很少的，为了能尽可能地避免具有临床意义的抗体漏检，通常在使用来自3个供者的红细胞的筛选细胞中，以下抗原一般需纯合表达: D、C、E、s、Fyb、Jka和Jkb。由于在蒙古人种中s-，Fya-的频率相对较低，因此有条件时可选用S 和Fya纯合表达的细胞。

4.筛选细胞通常不包括低频率抗原，所以针对低频率抗原的抗体会漏检。这种抗体只有在抗体鉴定时才能检测到，或在交叉配血时或新生儿出生后出现黄疸时才会被发现。

1.取受检者血清2滴加入各支标好的试管中。

2.取筛选红细胞悬液各1滴加入每个试管中，与血清混匀。

3.室温孵育10～15分钟后，( 900～1000)×g离心15秒。

4.观察是否溶血。轻轻重悬细胞扣，观察凝集反应，记录结果。

1.溶血或凝集都是阳性结果。如果溶血和凝集都存在，离心后要立即观察上清液的溶血情况。

2.重悬细胞扣后，红细胞呈平滑悬液状为阴性结果。

3.判读试验结果时，必须记录观察到的每个细胞样本的凝集强度或溶血现象。同一实验室中的技术人员必须使用同样的解释和符号(见表1-5-1)。

1.多数在室温或4℃下反应最强。

2.在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。

当抗体是IgG免疫球蛋白时，大多必须使用抗人球蛋白法、白蛋白介质法、低离子强度溶液法等方法之一才能使红细胞出现凝集反应。凝胶技术是近年来出现的另一种显示红细胞抗原-抗体反应的方法，它利用微柱中填充物的空间位阻或亲和反应，在离心力的作用下，使被抗体致敏的红细胞留在微柱上端，而未被致敏的红细胞沉至柱底。

同IgM血型同种抗体筛查试验。

除筛选细胞外，IgG血型同种抗体筛查试验还需以下试剂。

1.抗人球蛋白试剂单特异性(抗-IgG特异性)或多特异性(含抗IgG和抗补体)的抗人球蛋白试剂( AHG)均可，多数实验人员倾向于使用单特异性AHG以避免由结合补体引起的意外反应。

2.增效剂包括LISS、聚乙二醇( PEG)、凝胶柱、聚凝胺和固相技术等。复杂情况下还需使用其他技术。

( 1)在标记的试管中加入受检者血清2滴。

( 2)加2%～5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。

( 3)离心，观察是否溶血和凝集，并记录结果。离心速度和时间通常为( 900～1000)×g ( 3400转/分)，15秒。

( 4) 37℃孵育30～60分钟。

( 5)离心，观察是否溶血和凝集，并记录结果。离心速度和时间通常为( 900～1000)×g ( 3400转/ 分)，15秒。

( 6)洗涤细胞3～4次，最后一次洗涤后，弃去全部洗涤液。

( 7)将抗人球蛋白试剂加入细胞扣，充分混匀。

( 8)离心，观察凝集反应，记录结果。离心速度和时间通常为( 900～1000)×g ( 3400转/分)，15秒。

( 9)如结果为阴性，加入IgG致敏的细胞，离心并观察结果。离心速度和时间通常为( 900～1000)×g ( 3400转/分)，15秒。

抗人球蛋白试验抗原、抗体在低离子强度溶液的条件下发生反应，可缩短检出大多数抗体所需的温育时间。

称取氯化钠1.75g和甘氨酸18g，置1L的容量瓶内;加磷酸盐缓冲液( 0.15mol/ L KH ₂PO ₄11.3ml和0.15mol/L Na ₂HPO ₄8.7ml混合) 20ml;加蒸馏水定容至1L;用NaOH调节pH至6.7±0.1;加0.5g叠氮钠作为防腐剂。

加受检者血清2滴于标记的试管中;加入等体积的LISS;加2%～5%的试剂红细胞悬液1滴，混匀; 37℃孵育10～15分钟;离心，离心速度和时间通常为1000×g ( 3400转/ 分)，15秒。观察是否溶血或凝集，记录结果;按照抗人球蛋白试验操作步骤(见操作1)中的( 6)～( 9)操作。

将适量的试剂红细胞用盐水洗涤3次，弃去全部盐水;用LISS将红细胞配制成2%～3%悬液;加受检者血清2滴于标记的试管中;加LISS重悬的红细胞悬液2滴，混匀，37℃孵育10～15分钟;离心，离心速度和时间通常为1000×g ( 3400转/分)，15秒。观察是否溶血，轻轻重悬细胞扣观察是否凝集，记录结果;按照抗人球蛋白试验操作步骤中的( 6)～( 9)操作。

( 1)将受检者血清2滴，20% PEG溶液2滴，2%～5%的试剂红细胞悬液1滴混匀。

( 2) 37℃孵育15分钟。

( 3)不立即离心。

( 4)用生理盐水将红细胞洗涤4次，最后一次洗涤后，弃去全部洗涤液。

( 5)使用单特异性抗IgG，按照抗人球蛋白试验操作步骤中的( 7)～( 9)操作。

1.37℃孵育后的凝集/溶血均为阳性结果。

2.加入抗人球蛋白试剂后的凝集为阳性结果。

3.如加入IgG致敏的红细胞离心后出现凝集，则之前观察到的没有凝集的抗人球蛋白试验结果是阴性，如加入IgG致敏的红细胞也不见凝集，表示试验无效，必须重做。

1.孵育时间和红细胞的体积及浓度均为文献报道。各实验室根据条件可制订抗体检查的室内方法。

2.抗人球蛋白试验的步骤( 3)可省略以避免检出室温下反应的抗体。

3.抗人球蛋白试验的步骤( 6)～( 9)需连续完成，不得中断。

4.有些抗体与H抗原有关，它们与O型红细胞的反应比与A型、B型或AB型强，鉴定这些抗体还需要ABO细胞、ABO亚型细胞以及脐血细胞的协助。

5.血型同种抗体筛查试验也可用聚凝胺、酶法等多种检测IgG抗体的方法进行。

抗体筛查试验也有其局限性。阴性的试验结果不一定意味着受检血清中没有抗体，而只是在使用这些技术时，缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料等提供了另外的线索，就应扩大常规筛查方法。如遇到受检者血清同试剂红细胞呈阳性反应，而同供血者红细胞呈阴性反应，或者相反，可能由下列抗体所引起:

1.在A ₁和A ₁B型血清中偶尔有抗H。而O型红细胞上有大量的H抗原，A ₁和A ₁B细胞上的H抗原非常少。所以，含抗-H的血清能凝集全部O型试剂红细胞，但不凝集A ₁和A ₁B供血者的红细胞。同样，因为A ₂细胞有相当大量的H抗原，所以如果A ₁血清中含有抗-H时，与A ₂细胞交叉配血可能是不相合的。

2.抗-Le ^bH。这种抗体与O型Le ( b + )红细胞起反应，但不与A ₁或A ₁B型Le ( b + )红细胞凝集。因此，在抗体检查中检出有抗-Le ^bH，而这种抗体与A ₁或A ₁B型Le ( b + )红细胞作交叉配血可以是相合的。

3.在A ₂受血者血清中有抗A ₁，这种情况受检者血清与O型筛选细胞呈阴性，而与A ₁供血者细胞呈阳性反应。

4.受检者血清中存在与低频率抗原反应的抗体如Wr ^a，这种情况可能受检者血清与筛选细胞不反应，而与红细胞表面存在相应抗原的供者红细胞凝集。

5.受检者血清中存在仅与相应抗原的纯合子细胞起反应的抗体，这种情况可能与筛检细胞或供血者细胞发生凝集。