精液标本应在禁欲3～5天后用手淫或精液采集器的方法采集。首次就诊的患者应做两次精液检查，中间间隔7～9天。如果两次检查的结果相差悬殊，则应做第三次检查。精液采集包括射精过程的全部精液，如有遗撒或收集不完全的标本不能进行分析。留取的标本最好立即送检。不能用普通的避孕套收集精液，因为避孕套对精子的活力有影响。也不能用中断性交的方法留取精液，在性交中断时往往已射出精液的开始部分，不能完整地收集全部精液，同时阴道内的酸性分泌物、脱落细胞和细菌等会影响精液分析结果。如果需要做精液细菌学检查，标本的采集应遵循无菌原则，受试者预先排空膀胱，清洁双手和阴茎，容纳精液的容器应先灭菌消毒。

正常精液为灰白色混浊物，含有血 液时呈棕色。射出体外后5分钟内凝固，室温下在60分钟内自行液化。

一份收集完整的精液标本容量为2～6ml。

当正常已液化的精液从21G（内直径0.8mm）注射针头挤出或从垂直放置的5ml吸管内依重力自然滴落时，正常精液为细滴不连续成线，过于黏稠（可能为黏液含量过多）的精液则延续为超过2cm长的液线。也可用毛细玻璃管法测量黏稠度。

将一滴已液化的精液涂布在pH试纸上，可测出精液的pH。正常精液的pH为7.2～7.8。pH 7.8以上时提示可能有生殖道感染，7以下时可能存在输精管、精囊或附睾发育不全和无精子。

将已液化和混匀的精液从21G针头滴出一滴（10～15μl）于清洁载玻片上，覆以一个20mm×20mm或24mm×24mm的盖玻片，在18～24℃室温下放大400～600倍观察，可看到四类精子运动：①迅速直线前进运动；②缓慢的直线或非直线前进运动；③无前进运动；④不动。连续观察100个精子，计算出①和②类精子的百分率。最好用第二滴精液重复检查后再发报告。正常人前进运动（包括①和②类）精子占50%或以上，且迅速直线前进运动精子占25%或以上。

将50μl混匀的精液按1∶20比例加入稀释液，滴一滴于覆以盖玻片的血细胞计数板上，在湿润的小盒内放置5分钟使细胞沉降下来，放大200～400倍观察，记数形态完整的有尾的精子及每毫升的精子数。正常值为每毫升含20×10 ⁶个精子或以上，总计数为40×10 ⁶或以上。

用一滴（10～15μl）精液制成薄推片，用改良Papanicolaou或Giemsa染色法，在油镜下观察精子形态，记数100～200个精子，算出正常精子的百分率。正常精子头部为卵圆形，长与宽的比值为1∶5～1∶75，顶体占头部的40%～70%，没有颈段、中段或尾段缺陷。以下各类精子为形态异常精子：①头部缺陷：大头，小头，锥形头，空泡头和双头；②颈段和中段缺陷：膨胀，卷曲和形态不规则等；③尾部缺陷：断尾，多尾和卷尾等；④细胞质微滴：大于正常头部的1/3者。正常形态精子占50%以上为正常。

精液中除精子外，还含有尿道上皮细胞、未成熟的生精上皮细胞和白细胞等，这些细胞统称为圆细胞。对圆细胞特别是白细胞进行计数有重要意义。正常精液圆细胞数应低于5×10 ⁶/ml，白细胞总计数在1×10 ⁶/ml以下。白细胞数过多提示泌尿生殖道有炎症，生殖道感染可影响精液量、精子密度和活力等。疑有生殖道感染时应进一步做精液培养，培养精液标本的采集应注意防止污染。受试者先排空膀胱，用肥皂液清洁阴茎和双手，用无菌容器容纳精液，精浆分别作需氧和厌氧培养。

精子抗体（IgA和IgG）包裹于精子表面，对诊断免疫性不育症具有特异性。常用的检测方法有混合抗球蛋白反应（mixed antiglobulin reaction，MAR）试验和免疫珠试验。

将新鲜未作处理的精液与包裹人IgG的乳胶颗粒或羊红细胞混合，再加入单克隆的抗人IgG抗血清，活动精子与乳胶颗粒产生凝集即证明存在IgG精子抗体。40%或更多的精子产生凝集反应可诊断为免疫性不育症，10%～40%为可疑，少于10%为正常。

免疫珠是以共价键和兔抗人免疫球蛋白结合的聚丙烯酰胺小珠。精子的悬滴经缓冲液反复洗涤祛除精浆，制成精子悬液，然后在精子的悬滴中加入免疫珠悬液，用相差显微镜放大400倍观察精子与免疫珠的凝集反应。用IgA和IgG免疫珠可以分别检出带有相应抗体的精子。判断标准与MAR试验相同。

精浆中的生化成分比较复杂，有些生化成分是附性器官功能的指标。凡遇以下情况应进行生化分析：①精液标本容量少于2ml；②精子向前运动力显著下降；③需要评价附性器官功能时。

用上泳法或非连续Percoll梯度离心法制备精子，将密度调节至3.5×10 ⁶/ml，在1滴（50～100μl）精子悬滴中加入30个去透明带仓鼠卵母细胞，37℃温育3小时，在相差显微镜下观察胞浆中含有精子的卵母细胞数和每个卵母细胞所含精子的平均数。

通过荧光植物凝集素标记顶体的某一部分，如花生凝集素标记顶体外膜或豌豆凝集素标记顶体基质，然后用荧光显微镜或流式细胞仪观察，可以评价精子的顶体反应。该方法目前仍在研究之中，尚缺乏标准化的方法。

在排卵期前夕禁欲2天，性交后9～24小时内吸取宫颈黏液制成压片，在相差显微镜下观察精子的活力，活力分级与精液常规检查相同。每高倍视野有50个以上活动精子，快速直线前进运动精子20个以上为结果良好；每高倍视野活动精子少于10个，特别是没有快速直线前进运动的精子时，为精子穿透力减低或宫颈黏液异常。体内试验不仅可检测宫颈黏液中活精子数量，也可确定性交后一定时间内精子在宫颈的存活和运动情况。体内试验结果良好，可排除不育是宫颈因素所致。

常用试验方法是玻片试验，将一滴宫颈黏液置于载玻片上，覆以盖玻片，用直径100μm的硅化小玻璃珠使盖片和载片之间保持适当厚度，在盖片的两侧各滴一滴精液，使精液借毛细管作用向盖片下移动并呈指状突入宫颈黏液中，精子沿着指状突起通道进入宫颈黏液。在镜下观察，如精子穿入黏液并且90%以上的精子呈直线前进运动为精子穿透能力正常，如精子穿入黏液的长度距离精液与黏液的界面小于500μm为穿透能力差，如精子穿入黏液后很快失去活力或只有摆动或精子未能通过精液与黏液的界面为穿透能力异常。