2 组织培养实验室及仪器设备和器具的洗涤、灭菌

2.1 组织培养实验室

组织培养实验室[1][2]与微生物实验室总体上相似。它需要具备培养用具的洗涤和灭菌、培养基的配制和灭菌、外植体的处理和接种、为培养物提供无菌操作的条件和相对稳定的生长环境。为此可以根据实际，分别建立几个功能实验室，或在一个大实验室内划分出几个功能区。

2.1.1 化学实验室

化学实验室是组织培养实验室最基本的设施，应安装有自来水、洗物池和通风橱，并还需配备：药品柜、药品架（各种化学药品、洗涤剂、消毒剂）；玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、滴瓶、锥形瓶、洗液缸、移液管、培养皿、试管、离心管等）、蒸馏水；常用仪器如天平、pH计、冰箱、微波炉、高压灭菌锅（图2-1）、电炉、滤器及微孔滤膜（图2-2）、离心机、电动搅拌器等。这些都是很普通的和常见的，为植物材料洗涤、培养基配制和消毒灭菌所需。

图2-1 高压灭菌锅

A．人工监控的旧式灭菌锅；B．自动控制的高压灭菌锅

图2-2 滤器及微孔滤膜

A．不锈钢滤网；B．自制玻璃漏斗及塑料滤网；

C．国产滤器及微孔滤膜；D．用于收集滤液的细口瓶

2.1.2 接种室

接种室内最主要的是无菌操作间（sterile room），配备超净工作台（laminar air-flow cabi-net）（图2-3）、紫外灯、消毒酒精瓶、消毒液（NaClO、升汞）、无菌水、接种器具（包括镊子、剪刀、解剖刀、刮铲、接种针等）（图2-4）。

图2-3 超净工作台

图2-4 接种器具

A．解剖刀；B．刮铲；C1．中部弯曲镊子；C2．弯尖镊子；C3．直尖镊子；D．药勺（清除污染用）; E．剪刀

无菌操作间应建在清洁、干燥的地方，工作时不能有流动的空气，以免微生物及其孢子传播造成污染。最好在无菌操作间入口处设置缓冲间，并配有洁净的工作服和工作帽。选择超净工作台时要注意经过滤的清洁空气的送风方向：从接种者前方来风者最好，便于安放各种用具；若遇顶部送风或左边送风者，要调整用具安放位置，保证靠近来风方向有一个不受干扰的无菌操作区。新购的及已经使用了一年以上的超净工作台使用前要进行污染率测试。方法是：选用一组具有含糖的基本培养基的培养皿放入已经完成基本消毒程序的超净工作台内，打开培养皿盖，分别经5、10、15和20min后盖好，放入25～37℃恒温箱，数日后记录菌落数。经过比较，污染率低的超净工作台可以立即使用，污染率高的超净工作台要请生产厂家更换空气过滤板后再经测试合格才能使用。超净工作台可以单独放置在不易受到气流干扰的实验室的一角，也可以放置在无菌操作间内，这样双重保护可以大大减少来自空气的污染，对原生质体培养和细胞的显微操作有利。

2.1.3 培养室

培养室配备有培养架（图2-5），架上安装荧光灯管；光强度为300～3000lx，温度控制在25～28℃。一般荧光灯管发射的光谱偏蓝色光，培养植物还需要配合使用一定数量发射偏红色光的灯管，以符合植物光合作用的要求。

图2-5 培养架