第一节 培养基的制备

一、目的与要求

（1）学习制备培养基的基本技术。

（2）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。

二、原理

牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基。这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可作繁殖之用；制作固体培养基时须加2%琼脂；培养细菌时，应用稀酸或稀碱将pH调至中性或微碱性。

牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%, NaCl0.5%, pH值7.4～7.6。

三、材料与仪器

1．试剂

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L HCl溶液。

2．其他

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，天平。

四、操作步骤

1．称量

根据用量按比例依次称取成分。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

2．溶解

在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，溶化过程中需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。琼脂完全溶化后，补足所需水分。

3．调pH

用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCl溶液把pH值调至所需范围。

4．过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察。

5．分装

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内。

（1）液体分装。分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

（2）固体分装。分装试管，其装量不超过管高度的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三角瓶，以不超过容积的1/2为宜。

（3）半固体分装。装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

6．加棉塞

分装完成后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞）及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

7．包扎

在棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。

8．保存

灭菌后的培养基放入37℃培养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果，无污染方可使用。

思维聚焦

已经灭菌的培养基如何进行无菌检查？

知识拓展

pH是1909年由丹麦生物化学家SorenPeterLauritz Sorensen提出。pH值是氢离子浓度指数，一般在0～14之间。在常温下（25℃时），当它为7时溶液呈中性；小于7时呈酸性，值越小，酸性越强；大于7时呈碱性，值越大，碱性越强。通常使用pH试纸来检测溶液和水的酸碱程度。